[发明专利]一种蛋白纳米载体、负载有靶向物质的载体及制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种蛋白纳米载体、负载有靶向物质的载体及制备方法和应用，属于纳米材料技术领域；所述蛋白纳米载体以核酸适配体修饰的缺铁蛋白为壳体，包埋有流感病毒血凝素。本发明蛋白纳米载体具有良好生物相容性、较低免疫原性和较高转移效率，能选择性地刺激缺铁蛋白‑tfr1表达细胞。缺铁蛋白的pH敏感性允许流感病毒血凝素的释放。在流感病毒血凝素的帮助下，蛋白纳米载体负载的靶向物质能够逃离溶酶体，摆脱降解的命运，释放大量靶向物质进入细胞质，保证靶向物质的完整性和有效性。并且，缺铁蛋白纳米壳体没有明显毒副作用，为更安全有效地靶向递送提供了新方法。

技术领域

本发明涉及纳米材料技术领域，尤其涉及一种蛋白纳米载体、负载有靶向物质的载体及制备方法和应用。

背景技术

癌症一直是危害人类生命和健康的重要原因之一。临床上常用的癌症治疗方法为化疗。化疗虽然有一定的治疗效果，但它缺乏靶向性，对正常组织细胞的损伤给患者带来极大的痛苦。目前纳米材料为靶向递送药物提供了新思路。纳米材料携带小分子药物进入癌细胞，独特的尺寸优势减少了药物在体内循环过程中的损失，在一定程度上提高了药物的治疗效率。此外，纳米载体的存在也提高了小分子药物的水溶性和稳定性。

现有技术公开的纳米载体主要是金属纳米粒子，如纳米金颗粒。但是金属纳米粒子存在新陈代谢慢、容易在体内堆积的问题，脂质体体积大且不均匀，在生物安全方面仍然存在许多隐患。

发明内容

本发明的目的在于提供一种蛋白纳米载体、负载有靶向物质的载体及制备方法和应用，本发明的蛋白纳米载体生物安全性好、代谢快、递送效率高。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种蛋白纳米载体，以核酸适配体修饰的缺铁蛋白为壳体，包埋有流感病毒血凝素。

优选的，所述核酸适配体包括核酸AS1411适配体。

本发明还提供了上述方案所述蛋白纳米载体在制备靶向递送载体中的应用。

本发明还提供了一种负载有靶向物质的载体，包括上述方案所述蛋白纳米载体和结合体，所述结合体包埋在所述蛋白纳米载体的壳体内，所述结合体为双链siRNA和核定位信号肽的结合体。

优选的，所述双链siRNA是由第一RNA和第二RNA碱基互补配对得到；所述第一RNA的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；所述第二RNA的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。

优选的，所述双链siRNA的制备方法包括以下步骤：将第一RNA溶液和第二RNA溶液混合，进行碱基互补配对反应，得到双链siRNA；所述碱基互补配对反应的时间为5～6h；所述碱基互补配对反应的温度为20～30℃。

本发明还提供了上述方案所述载体的制备方法，包括以下步骤：

1)将双链siRNA、核定位信号肽、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐溶液和N-羟基琥珀酰亚胺溶液混合，进行结合反应，得到结合反应产物，所述结合反应产物中包含siRNA和核定位信号肽的结合体，命名为siRNA/NLS；

2)将缺铁蛋白于pH值为2～2.5的条件下进行解离，得到解离缺铁蛋白；将所述结合反应产物、流感病毒血凝素溶液和解离缺铁蛋白进行混合，得到混合液，调节所述混合液的pH值至7.4～7.6，进行组装，得到核壳结构，命名为Apn/siRNA/NLS/HA；

3)将所述Apn/siRNA/NLS/HA、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐溶液和NHS溶液混合，得到混合液，对所述混合液进行第一透析，得到第一透析液；所述第一透析采用的透析膜的截留分子量为12～14KD；

4)将所述第一透析液和核酸AS1411适配体溶液混合，进行修饰，得到修饰产物，所述修饰产物中包含所述载体。