[发明专利]登革热NS1抗原、IgG/IgM抗体两联检测试纸条、检测卡及试剂盒

权利要求书

1.一种登革热NS1抗原、IgG/IgM抗体两联检测试纸条，其特征在于：试纸条包括登革热NS1抗原试纸条和登革热IgG/IgM抗体试纸条，登革热NS1抗原试纸条包括第一金标垫层和第一硝酸纤维素膜，第一金标垫层固相化有登革热NS1单克隆抗体-胶体金复合物，第一硝酸纤维素膜包被有四个血清型的登革热NS1单克隆抗体的检测线，登革热IgG/IgM抗体试纸条包括第二金标垫层和第二硝酸纤维素膜，第二金标垫层固相化有四个血清型的登革热重组抗原-胶体金复合物，第二硝酸纤维素膜包被有鼠抗人IgG单克隆抗体的检测线T1、鼠抗人IgM单克隆抗体的检测线T2；

第一硝酸纤维素膜上的四个血清型登革热NS1单克隆抗体的检测线包被方法如下：

检测线以四个血清型的登革热NS1单克隆抗体，按照2：1：1：1的比例混合，以1.0~1.2mg/mL的浓度，质控线羊抗鼠IgG以1.0~ 1.5mg/mL浓度，均用10mmoL的PBS缓冲液进行稀释，并加入2%~4%的蔗糖，包被于第一硝酸纤维素膜上，并干燥；

登革热重组抗原-胶体金复合物的制备方法如下：

采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金，先将登革热四个血清型的重组抗原按照5：1：1：1的比例混合，在金溶胶中按照15~20μg/mL比例缓慢加入混合后的登革热重组抗原，充分反应后，以7000~10000rpm离心30min，弃上清，10倍浓缩，静置反应20~30min，制得登革热重组抗原-胶体金复合物。

2.如权利要求1的登革热NS1抗原、IgG/IgM抗体两联检测试纸条，其特征在于：登革热NS1单克隆抗体-胶体金复合物的制备方法如下：

采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金，在金溶胶中按10~15μg/mL比例缓慢加入登革热NS1单克隆抗体，充分反应后，以5000~8000rpm离心30min，弃上清，10倍浓缩，静置反应10~20min，制得登革热NS1单克隆抗体-胶体金复合物。

3.如权利要求1的登革热NS1抗原、IgG/IgM抗体两联检测试纸条，其特征在于：第二金标垫层还固相化有羊IgG抗体-胶体金复合物或兔IgG抗体-胶体金复合物或鸡IgY抗体-胶体金复合物。

4.如权利要求3的登革热NS1抗原、IgG/IgM抗体两联检测试纸条，其特征在于：鸡IgY抗体-胶体金复合物的制备方法如下：

在金溶胶中按10~15μg/mL比例缓慢加入鸡IgY抗体，充分反应后，以8000~10000rpm离心30min，弃上清，10倍浓缩，制得鸡IgY抗体-胶体金复合物。

5.如权利要求1的登革热NS1抗原、IgG/IgM抗体两联检测试纸条，其特征在于：第二硝酸纤维素膜还包被有兔抗羊IgG抗体或羊抗兔IgG抗体或山羊抗鸡IgY抗体的质控线，第二硝酸纤维素膜上的鼠抗人IgG单克隆抗体的检测线T1、鼠抗人IgM单克隆抗体的检测线T2、山羊抗鸡IgY抗体的质控线包被方法如下：

鼠抗人IgG抗体以1.0~1.5mg/mL浓度、鼠抗人IgM 抗体以2.0~2.2mg/mL浓度，质控线山羊抗鸡IgY抗体以2.0~ 2.2mg/mL浓度，均用10mmoL的PBS缓冲液进行稀释，并加入2%~3%的蔗糖，包被于第二硝酸纤维素膜上，并干燥。

6.如权利要求1的登革热NS1抗原、IgG/IgM抗体两联检测试纸条，其特征在于：登革热IgG/IgM抗体试纸条还包括样品垫层，第二硝酸纤维素膜和样品垫层之间设置有可粘贴的滤血垫层。

7.一种登革热NS1抗原、IgG/IgM抗体两联检测卡，其特征在于：检测卡的一侧设置有NS1抗原检测卡槽，检测卡的另一侧设置有IgG/IgM抗体检测卡槽，NS1抗原检测卡槽内设置有如权利要求1-6任一项的登革热NS1抗原试纸条，IgG/IgM抗体检测卡槽内设置有如权利要求1-6任一项的登革热IgG/IgM抗体试纸条，检测卡下端对应NS1抗原检测卡槽位置处设置有第一加样孔，检测卡中部对应IgG/IgM抗体检测卡槽位置处设置有第二加样孔，检测卡下端对应IgG/IgM抗体检测卡槽位置处设置有样本稀释液加入孔。

8.一种登革热NS1抗原、IgG/IgM抗体两联检测试剂盒，其特征在于：试剂盒包括如权利要求7的检测卡和样本稀释液。