[发明专利]一种多项呼吸道抗原检测卡及试剂盒

权利要求书

1.一种多项呼吸道抗原检测卡，其特征在于：检测卡包括甲型流感病毒抗原试纸条、乙型流感病毒抗原试纸条、呼吸道腺病毒抗原试纸条、呼吸道合胞病毒抗原试纸条和肺炎支原体抗原试纸条，甲型流感病毒抗原试纸条、乙型流感病毒抗原试纸条、呼吸道腺病毒抗原试纸条、呼吸道合胞病毒抗原试纸条和肺炎支原体抗原试纸条均包括胶体金结合物垫，胶体金结合物垫包括链霉亲和素结合物垫和双纳米颗粒双标记抗体结合物垫；

链霉亲和素结合物垫的制备方法如下：

调节40nm胶体金溶液至PH为9.0，加入链霉亲和素，终浓度为8～15μg/mL，室温静置1h，加入1/10体积含10%BSA磷酸盐溶液，室温静置1h，在4℃8000rpm离心30min获得沉淀物即为胶体金标记的链霉亲和素，取玻璃纤维放入不锈钢盘，量取复溶后胶体金标记物40～50mL倒入不锈钢盘，使金溶液完全均匀吸收，干燥，得链霉亲和素结合物垫；

双纳米颗粒双标记抗体结合物垫的制备方法如下：

调节13nm胶体金溶液PH至8.5，加入相应标记抗体，甲型流感病毒抗体、乙型流感病毒抗体、呼吸道腺病毒抗体、呼吸道合胞病毒抗体或肺炎支原体抗体，终浓度15～20μg/mL，室温静置1h，加入1mg/mL 生物素-N-羟基丁二酰亚胺酯溶液，终浓度为1～2µmol/L，4℃静置24h，加入1/10体积含10%BSA磷酸盐溶液，室温静置1h，在4℃10000rpm离心30min获得沉淀即为小颗粒纳米金；

调节80nm胶体金溶液PH至9.0，加入相应标记抗体，甲型流感病毒抗体、乙型流感病毒抗体、呼吸道腺病毒抗体、呼吸道合胞病毒抗体或肺炎支原体抗体，终浓度20～30μg/mL，室温静置1h，加入1mg/mL 生物素-N-羟基丁二酰亚胺酯溶液，终浓度为1～2µmol/L，4℃静置24h，加入1/10体积含10%BSA磷酸盐溶液，室温静置1h，在4℃8000rpm离心45min获得沉淀即为大颗粒纳米金；

小颗粒纳米金与大颗粒纳米金按一定体积比混合制得双纳米颗粒双标记抗体混合物，其比例为3:5；

取玻璃纤维放入不锈钢盘，量取复溶后双纳米颗粒双标记抗体混合物40～50mL倒入不锈钢盘，使金溶液完全均匀吸收，干燥，得双纳米颗粒双标记抗体结合物垫。

2.如权利要求1的一种多项呼吸道抗原检测卡，其特征在于：甲型流感病毒抗原试纸条、乙型流感病毒抗原试纸条、呼吸道腺病毒抗原试纸条、呼吸道合胞病毒抗原试纸条和肺炎支原体抗原试纸条均包括样品垫，样品垫使用样品垫处理液处理，样品垫处理液包括pH为8.0～11.0的缓冲液、大分子聚合物、表面活性剂、封闭剂和阻断剂。

3. 如权利要求2的一种多项呼吸道抗原检测卡，其特征在于：相对于每100mL的缓冲液， 大分子聚合物的添加量为0.05～0.20g，表面活性剂的添加量为0.05～0.20mL，封闭剂的添加量为0.05～0.20g，阻断剂的添加量为0.5～2.0mL。

4.如权利要求2的一种多项呼吸道抗原检测卡，其特征在于：缓冲液为Tris缓冲液、磷酸缓冲液、硼酸缓冲液中的一种；大分子聚合物为PVP、PEG20000中的至少一种；表面活性剂为吐温20、吐温80、曲拉通100、S9、S21中的至少两种；封闭剂为酪蛋白、酪蛋白钠、BSA中的一种；阻断剂为HBR。

5.如权利要求4的一种多项呼吸道抗原检测卡，其特征在于：缓冲液为10～100mM的Tris-HCL缓冲液；大分子聚合物为PVP；表面活性剂为曲拉通100、S9；封闭剂为酪蛋白钠；阻断剂为HBR。

6.如权利要求2的一种多项呼吸道抗原检测卡，其特征在于：还包括硝酸纤维素膜、吸水纸和底板，底板的中间位置粘贴硝酸纤维素膜，上方粘贴吸水纸，下方粘贴制备的链霉亲和素结合物垫、双纳米颗粒双标记抗体结合物垫和样品垫。

7.如权利要求6的一种多项呼吸道抗原检测卡，其特征在于：硝酸纤维素膜上包被相应抗体和羊抗鼠IgG抗体，形成检测线和质控线。