[发明专利]一种测定呕吐毒素的分子印迹电化学传感器的制备方法及应用

权利要求书

1.一种测定呕吐毒素的分子印迹电化学传感器在呕吐毒素检测中的应用；所述测定呕吐毒素的分子印迹电化学传感器的制备方法包括以下步骤：

1）玻碳电极预处理：先将玻碳电极在含有氧化铝浆液的麂皮表面上打磨至光滑，然后在乙醇和去离子水中依次超声处理4-6 min后在红外灯下烘干，将羧基碳纳米管分散在含有羧甲基纤维素的二甲基甲酰胺溶液中，并将所得混合物涡旋2分钟后超声15分钟，然后将5 µL的混合物滴涂到抛光的玻碳电极表面上，并在红外灯下烘干得到羧基碳纳米管修饰的玻碳电极COOH-MWCNTs/GCE；

2）分子自组装膜修饰电极：将呕吐毒素与精氨酸和丙烯酰胺的复合功能单体通过超声在电解质中均匀混合，静置后自组装得到混合液，将步骤1）所得羧基碳纳米管修饰的玻碳电极COOH-MWCNTs/GCE浸入混合液，在扫描速率150 mV·s^-1、电位范围-1.5 V至+2.3 V的条件下，使用循环伏安法电化学聚合3-7圈形成P-Arg-Am-MIP膜；其中，超声时间为4-6 min，电解质为0.1 M的LiClO₄溶液，静置时间为9-11 min；

3）洗脱模板分子：将步骤2）所得P-Arg-Am-MIP膜修饰的电极COOH-MWCNTs/GCE置于红外灯下烘干，然后浸泡在乙腈中洗脱，使呕吐毒素模板分子从印迹聚合物上洗脱，洗脱后孵育即得呕吐毒素分子印迹电极P-Arg-Am-MIP/COOH-MWCNTs/GCE；

4）制备分子印迹电化学传感器：利用呕吐毒素分子印迹电极P-Arg-Am-MIP/COOH-MWCNTs/GCE作为工作电极制备呕吐毒素分子印迹电化学传感器。

2. 根据权利要求1所述应用，其特征在于，步骤1）所述氧化铝浆液中氧化铝浓度为0.05 µM；所述羧基碳纳米管、羧甲基纤维素和二甲基甲酰胺质量体积比为1:0.3:1。

3. 根据权利要求1所述应用，其特征在于，步骤2）所述呕吐毒素浓度为0.8-1.2 mM，所述复合功能单体浓度为4.5-5.5 mM；所述呕吐毒素与所述复合功能单体的质量比为1:1至1:9。

4. 根据权利要求1所述应用，其特征在于，步骤3）洗脱时间为5-25 min，孵育时间为0.5-9.5 min。

5.根据权利要求1所述应用，其特征在于，呕吐毒素检测包括以下步骤：

A、权利要求1-4任一项所述分子印迹电化学传感器采用三电极体系进行测定，饱和甘汞电极作为参比电极，铂电极作为对电极；

B、使用差分脉冲伏安法在5 mM [Fe(CN)₆]^4-/3-溶液中，以电位范围为-0.1 V至+0.5 V对呕吐毒素溶液进行检测，绘制工作曲线；

C、取待测样品，采用乙腈水溶液作为提取溶剂，超声处理后离心取上清液，过滤后在4℃下储存，将待测样品溶液代替步骤B呕吐毒素溶液进行检测。

6. 根据权利要求5所述应用，其特征在于，步骤C所述乙腈水溶液的乙腈与水体积比为84:16，超声处理时间为25-35 min。

7. 根据权利要求5所述应用，其特征在于，步骤C所述超声处理后离心的速度为14000-16000 rpm、时间为9-11 min，过滤的滤膜为0.22 μm的无菌膜。

8. 根据权利要求5所述应用，其特征在于，为了验证真实样品中呕吐毒素检测效果，采用了3个加标浓度0.1、0.5、1.0 mg/kg检测其回收率。