[发明专利]一种不耐热的低温外切菊粉酶突变体MutG360Δ9有效
| 申请号： | 202110041619.7 | 申请日： | 2021-01-13 |
| 公开（公告）号： | CN112725310B | 公开（公告）日： | 2022-06-24 |
| 发明（设计）人： | 张蕊;周峻沛;黄遵锡;岑潇龙;许波;韩楠玉;唐湘华;李俊俊;吴倩;高艳秀 | 申请（专利权）人： | 云南师范大学 |
| 主分类号： | C12N9/24 | 分类号： | C12N9/24;C12N15/56;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京众合诚成知识产权代理有限公司 11246 | 代理人： | 刘妮 |
| 地址： | 650500 云*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 耐热 低温 外切 菊粉 突变体 mutg360 | ||
1.一种不耐热的低温外切菊粉酶突变体MutG360Δ9，其特征在于，该突变体MutG360Δ9的氨基酸序列如SEQ ID NO. 1所示。
2.如权利要求1所述的突变体MutG360Δ9的编码基因mutG360Δ9，其特征在于，所述编码基因mutG360Δ9的核苷酸序列如SEQ ID NO. 2所示。
3.包含如权利要求2所述的编码基因mutG360Δ9的重组载体。
4.包含如权利要求2所述的编码基因mutG360Δ9的重组菌。
5.如权利要求1所述的突变体MutG360Δ9的制备方法，其特征在于，该方法包含：
将核苷酸序列如SEQ ID NO. 4所示的野生外切菊粉酶基因inuAMN8和表达载体pEasy-E1相连接，获得包含inuAMN8的重组表达质粒pEasy-E1-inuAMN8；
以质粒pEasy-E1-inuAMN8为模板，以如SEQ ID NO. 7和SEQ ID NO. 8所示核苷酸序列的突变引物，通过PCR扩增得到包含mutG360Δ9的重组表达质粒pEasy-E1-mutG360Δ9；
将重组表达质粒pEasy-E1-mutG360Δ9转化大肠杆菌BL21(DE3)，获得包含mutG360Δ9的重组菌株；
培养重组菌株，诱导重组外切菊粉酶突变体MutG360Δ9表达，以获得重组外切菊粉酶突变体MutG360Δ9。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述包含mutG360Δ9的重组菌株的制备为，将所述重组表达质粒pEasy-E1-mutG360Δ9经DpnI酶消化，利用Mut Express® IIFast Mutagenesis Kit试剂盒将消化产物进行连接，再通过热激方式转化到大肠杆菌BL21(DE3)中。
7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述诱导采用IPTG进行诱导。
8.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述重组外切菊粉酶突变体MutG360Δ9表达的产物经Nickel-NTA Agarose亲和，再经0–500mM且不为0mM的咪唑洗脱纯化，获得重组外切菊粉酶突变体MutG360Δ9。
9.如权利要求1所述的突变体MutG360Δ9在食品行业中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述的食品行业包含：酿酒行业。
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