[发明专利]热盐性改变的菊粉酶突变体MutY119T及其应用有效
| 申请号： | 202110041566.9 | 申请日： | 2021-01-13 |
| 公开（公告）号： | CN112725306B | 公开（公告）日： | 2022-06-24 |
| 发明（设计）人： | 周峻沛;张蕊;黄遵锡;岑潇龙;唐湘华;许波;李俊俊;韩楠玉;吴倩;高艳秀 | 申请（专利权）人： | 云南师范大学 |
| 主分类号： | C12N9/24 | 分类号： | C12N9/24;C12N15/56;C12N15/10;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京众合诚成知识产权代理有限公司 11246 | 代理人： | 刘妮 |
| 地址： | 650500 云*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 热盐性 改变 菊粉 突变体 muty119t 及其 应用 | ||
1.热盐性改变的菊粉酶突变体MutY119T，其特征在于，该菊粉酶突变体MutY119T的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.如权利要求1所述的菊粉酶突变体MutY119T的编码基因mutY119T。
3.根据权利要求2所述的编码基因mutY119T，其特征在于，该编码基因mutY119T的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
4.包含如权利要求2或3所述的编码基因mutY119T的重组载体。
5.包含如权利要求2或3所述的编码基因mutY119T的重组菌。
6.如权利要求1所述的菊粉酶突变体MutY119T的制备方法，其特征在于，该制备方法包含：
（1）将核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的野生外切菊粉酶基因inuAMN8和表达载体pEasy-E1相连接，获得包含inuAMN8的重组表达质粒pEasy-E1-inuAMN8；
（2）以质粒pEasy-E1-inuAMN8为模板，采用的引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.7和SEQID NO.8所示，通过PCR扩增得到包含mutY119T的重组表达质粒pEasy-E1-mutY119T；
（3）将重组表达质粒pEasy-E1-mutY119T转化大肠杆菌BL21(DE3)，获得包含mutY119T的重组菌株；
（4）培养重组菌株，诱导重组外切菊粉酶突变体MutY119T表达；
（5）回收并纯化所表达的重组外切菊粉酶突变体MutY119T。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述包含mutY119T的重组菌株的制备为，将所述重组表达质粒pEasy-E1-mutY119T经DpnI酶消化，利用Mut Express® II FastMutagenesis Kit试剂盒将消化产物进行连接，再通过热激方式转化到大肠杆菌BL21(DE3)中。
8.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述诱导采用IPTG进行诱导。
9.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述包含mutY119T的重组菌株的表达产物经Nickel-NTA Agarose亲和，再经0~500mM且不为0mM的咪唑洗脱纯化，获得重组外切菊粉酶突变体MutY119T。
10.如权利要求1所述的突变体MutY119T在食品行业的应用。
11.根据权利要求10所述的应用，其特征在于，所述的食品行业包含：酿酒行业。
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