[发明专利]一种通过低盐絮凝法从螺旋藻中提取藻蓝蛋白的方法

权利要求书

1.一种通过低盐絮凝法从螺旋藻中提取藻蓝蛋白的方法，其特征在于，所述方法具体包括以下步骤：

(1)使用低盐溶液分离藻蓝蛋白

在500kg新鲜螺旋藻泥中加入5倍重量、浓度为150g/L的柠檬酸钠溶液，然后加入终浓度为20g/L的双乙酸钠，用浓度为150g/L的碳酸钾溶液调节pH值为7.0，将螺旋藻盐溶液通过2000rpm剪切机进行螺旋藻破碎，破碎后的尺寸为10～40微米；破碎后螺旋藻的盐溶液在室温条件下静置24小时，通过盐离子的静电中和作用使藻蓝蛋白从螺旋藻细胞碎片上完全分离；

(2)絮凝

用0.2mol/L盐酸将聚合硫酸铁配制成浓度为10g/L的溶液，将聚合硫酸铁溶液以50L/min的速度滴加到破碎螺旋藻的盐溶液中，聚合硫酸铁的最终浓度为500mg/L；用浓度为200g/L的氢氧化钾溶液调节破碎螺旋藻液的pH值为6.0，静置1小时，用浓度为50g/L醋酸将分子量为6×10⁵的壳聚糖配制成浓度为50g/L的脱乙酰度为65％壳聚糖溶液，将配置的壳聚糖溶液滴加到破碎螺旋藻液中，使得壳聚糖最终浓度为3.5g/L，静置1.5小时；

(3)离心获得藻蓝蛋白水溶液

在蝶式离心机上，以500rpm速度处理经絮凝处理的破碎螺旋藻液，流量1.0m³/h，排渣周期60秒，排渣时间0.15秒，收集离心上清液获得藻蓝蛋白水溶液，在截留分子量为20000Da的超滤膜设备上用10倍的水洗涤3次，溶液中藻蓝蛋白的含量为60g/L，纯度为1.2；经过计算，最终藻蓝蛋白的回收率为85％。

2.一种通过低盐絮凝法从螺旋藻中提取藻蓝蛋白的方法，其特征在于，所述方法具体包括以下步骤：

(1)使用低盐溶液分离藻蓝蛋白

在150kg螺旋藻干粉中加入10倍重量的、浓度为80g/L硫酸钠溶液；然后加入终浓度为10g/L山梨酸钾和30g/L的纳他霉素，用100g/L的氢氧化钠溶液调节pH值为6.0；将制备的螺旋藻盐溶液通过1000rpm剪切机进行螺旋藻破碎，破碎后的尺寸为20～50微米；破碎后螺旋藻的盐溶液在室温条件下静置8小时，利用盐离子的静电中和作用使藻蓝蛋白从螺旋藻细胞碎片上完全分离；

(2)絮凝

用0.2mol/L盐酸将聚合硫酸铁配制成2g/L的溶液；将聚合硫酸铁溶液以10L/min的速度滴加到破碎螺旋藻溶液中；破碎螺旋藻溶液中的聚合硫酸铁的最终浓度为100mg/L；用200g/L的氢氧化钾溶液调节破碎螺旋藻液的pH值为6.5，静置0.5小时；用重量百分比浓度为20g/L醋酸将分子量为5×10⁴、脱乙酰度为85％的壳聚糖配制成浓度为30g/L的壳聚糖溶液；将壳聚糖溶液滴加到破碎螺旋藻液中，使得壳聚糖最终浓度为0.5g/L；然后用100g/L的碳酸氢钠溶液调节破碎螺旋藻液的pH值为6.0，静置2小时；

(3)离心获得藻蓝蛋白水溶液

在蝶式离心机上，以200rpm速度处理经絮凝处理的破碎螺旋藻液，流量0.7m³/h，排渣周期30秒，排渣时间0.07秒；收集离心上清液获得藻蓝蛋白水溶液，在截留分子量为5000Da的超滤膜设备上用3倍的水洗涤5次；溶液中藻蓝蛋白的含量为40g/L，纯度为0.99；经过计算，最终藻蓝蛋白的回收率为89.5％。

3.一种通过低盐絮凝法从螺旋藻中提取藻蓝蛋白的方法，其特征在于，所述方法具体包括以下步骤：

(1)使用低盐溶液分离藻蓝蛋白

在50kg螺旋藻干粉加入20倍重量、浓度为110g/L的硫酸铵溶液，加入终浓度为25g/L的乳酸链球菌素，然后用150g/L的碳酸钠溶液调节pH值为7.0，将螺旋藻盐溶液通过3000rpm剪切机进行螺旋藻破碎，破碎后的尺寸为50～80微米；破碎后螺旋藻的盐溶液在室温条件下静置12小时，通过盐离子的静电中和作用使藻蓝蛋白从螺旋藻细胞碎片上完全分离；

(2)絮凝

用0.2mol/L盐酸将聚合硫酸铁配制成浓度为10g/L的溶液；将聚合硫酸铁溶液以25L/min的速度滴加到破碎螺旋藻的盐溶液中，聚合硫酸铁的最终浓度为400mg/L；用重量体积比为120g/L的氨水调节破碎螺旋藻液的pH值为7.0，静置0.9小时；

用100g/L磷酸将分子量为10×10⁶、脱乙酰度为95％的壳聚糖配制成浓度为20g/L的壳聚糖溶液；将壳聚糖溶液滴加到破碎螺旋藻液中，使得壳聚糖最终浓度为5g/L；用120g/L的碳酸氢钠溶液调节破碎螺旋藻液的pH值为7.5，静置1.5小时；

(3)离心获得藻蓝蛋白水溶液

在管式离心机上，以10000rpm速度处理经絮凝处理的破碎螺旋藻液，流量0.9m³/h；收集离心上清液获得藻蓝蛋白水溶液，在截留分子量为20000Da的超滤膜设备上用10倍的水洗涤3次；溶液中藻蓝蛋白的含量为100g/L，纯度为2.0；经过计算，最终藻蓝蛋白的回收率为83.5％。