[发明专利]一种云杉种子完全灭菌技术

说明书

本发明属于种子处理领域，具体涉及一种云杉种子的完全灭菌技术。具体技术方案为：使用1％～10％，w/v，的AgNO₃溶液浸泡种子5～30min。使用特定培养皿进行灭菌操作，所述培养皿至少包括两层，其中一层为可盛放待灭菌种子的处理层，各层间可控进行液体流通。本发明首次提供了一种可用于云杉种子完全灭菌方法，灭菌效果高达100％；并基于该方法提供了一种种子萌芽方法，发芽率高达90％以上。

技术领域

本发明属于种子处理领域，具体涉及一种云杉种子的完全灭菌技术。

背景技术

为了研究云杉种子内生菌对种子萌发和幼苗定植的影响，首要解决的问题是消灭种子表面的微生物。其次，为了比较在内生菌缺失的情况下种子的萌发以及幼苗定植的情况，就需要连同杀灭种子内部的微生物。同时为了确定特定微生物对种子萌发及随后植物生长的影响，在有意引入特定的微生物前也应当消灭未经确认的种子微生物。但由于种子完全灭菌技术的局限性，相同的灭菌剂、灭菌浓度以及灭菌时间对不同种子完全的微生物会有不同的灭菌效果，而且一般灭菌剂通常会对种子萌发造成伤害。对于云杉种子，目前较多的是采用0.3％的K₂MnO₄溶液浸泡15min，进行简单的消毒，这样的操作无法将种子表面的微生物消灭干净，更不能杀灭云杉种子内生菌，而且残留的有害微生物可能还会影响种子的萌发。此外，还未发现特定的灭菌剂能够在不影响云杉种子萌发和幼苗后续定植的情况下杀灭其种子内外部的微生物。

因此，亟需一种能将云杉种子微生物完全杀灭干净的技术。

发明内容

本发明的目的是提供一种云杉种子的完全灭菌和萌发的方法。

为实现上述发明目的，本发明所采用的技术方案是：一种云杉种子完全灭菌的方法，使用1％～10％，w/v，AgNO₃溶液浸泡种子5～30min。

优选的，AgNO₃溶液的浓度为3％。

优选的，AgNO₃溶液的浓度为3％，w/v，浸泡时间为15min。

优选的，使用特定培养皿进行灭菌操作，所述培养皿至少包括两层，其中一层为可盛放待灭菌种子的处理层，各层间可控进行液体流通。

优选的，所述培养皿包括两层，另一层为可盛放液体的废液层，废液层位于处理层下方，处理层与废液层间设置第一液体流通结构，所述第一液体流通结构包括设置于处理层下方的连通排废板，所述处理层上贯穿设置至少一个上层第一排废孔，所述连通排废板上对应设置至少一个下层第二排废孔，连通排废板可相对于处理层旋转，使上层第一排废孔旋转至与下层第二排废孔对齐，实现废液从处理层流入废液层中。

相应的，一种云杉种子的萌芽方法，将按照所述方法灭菌后的云杉种子在15℃，12h光照、12h黑暗交替环境中进行萌芽。

优选的，将云杉种子置于PDA培养基或LB培养基上进行萌芽。

优选的，云杉种子在灭菌前，先用水浸泡15～25h。

本发明具有以下有益效果：本发明首次提供了一种可用于云杉种子完全灭菌方法，此处“完全”的含义，指同时杀灭云杉种子的表面微生物和内生菌。使用本发明的方法，灭菌效果高达100％；并基于该方法提供了一种种子萌芽方法，最高发芽率也高达90％以上。为了更便捷、准确地进行上述灭菌操作，本发明还提供了一种培养皿，可同时进行多梯度、多重复灭菌试验。事实上，本发明提供的培养皿也可用于其他需要多梯度、多重复的试验上。

附图说明

图1为本发明的结构示意图；

图2为图1的A-A视图(左视剖面图)；

图3为本发明提供的培养皿盖上培养皿盖后的外壳俯视图；

图4为本发明连通排废板俯视图；