[发明专利]抗蜜蜂幼虫芽孢杆菌卵黄抗体及其制备方法和应用

说明书

本发明属于生物制药领域，涉及一种抗蜜蜂幼虫芽孢杆菌卵黄抗体及其制备方法和应用。本发明的抗蜜蜂幼虫芽孢杆菌卵黄抗体为利用灭活的蜜蜂幼虫芽孢杆菌为抗原免疫产蛋鸡，收集所述免疫蛋鸡的鸡蛋，并从免疫鸡蛋卵黄中分离和纯化得到。本发明分离、纯化得到纯度较高的抗蜜蜂幼虫芽孢杆菌卵黄抗体，该抗体具有较强的中和蜜蜂幼虫芽孢杆菌活性，能够应用于制备预防及治疗蜜蜂幼虫芽孢杆菌感染引起的蜜蜂疾病。

技术领域

本发明属于生物制药领域，具体涉及一种抗蜜蜂幼虫芽孢杆菌卵黄抗体及其制备方法和应用。

背景技术

蜜蜂幼虫芽孢杆菌(Paenibacillus larvae)是一种引起美洲幼虫腐烂病(AFB)的革兰氏阳性蜜蜂致病菌。AFB是一种可以引起蜜蜂幼虫和蜂蛹的急性、高死亡率的传染病，其只发生于蜜蜂的幼虫，幼蜂一旦感染后，如果没有适当的治疗，感染的蜜蜂很快就会死亡，而且还会扩散到整个蜂群，导致整个蜂群死亡，甚至会感染其他没有接触的蜂群。蜜蜂幼虫芽孢杆菌对西方蜜蜂1日龄幼虫的致病力很高，对2日龄幼虫的致病力大为降低，3日龄以上的幼虫与成蜂则不感染。东方蜜蜂对本病具有抗性。蜜蜂幼虫芽孢杆菌通常只有孢子期具有感染力，在一定条件下产生的芽孢有7层结构包围，这种特殊结构使得蜜蜂幼虫芽孢杆菌的芽孢具有特别强的生命力，对热、化学消毒剂等有极强的抵抗力，在高温干燥等恶劣环境中至少能存活35年。芽孢随饲料被蜜蜂幼虫摄入后，约1日后在幼虫肠(胃)内萌发，然后穿过胃壁进入体腔，在蜜蜂血淋巴及组织内大量繁殖。染病症状表现为体表颜色有原来的白色逐渐变成黑色，身体脱水，体表有微小的鳞片状物，最后干枯，紧贴在蜂巢房壁上。

现有技术对于AFB的防治，主要以抗生素为主，包括土霉素、氯霉素、羟四环素等。但随着抗生素的管制日趋严格，抗生素的使用受到越来越多的限制。目前对于AFB并无核准使用的防治药剂，蜂场主要通过如更换巢脾、消毒蜂具、烧毁掩埋染病蜂群等措施预防该病的大面积爆发。但对于已经染病的蜂群，缺乏有效的应对手段。

卵黄抗体(Immunoglobulin of yolk,IgY)是从经抗原免疫的禽类所产卵中分离的具有特异性的蛋白。目前，卵黄抗体作为替代抗生素的新型饲料添加剂，正在引起人们的关注。卵黄抗体的优势主要体现在：通过与抗原特异性结合，发挥抗菌和抗病毒作用；不会产生药物残留；生产技术较为成熟，产量高；可以减少对动物的应激，提高动物的福利。目前，卵黄抗体在畜牧业上已经得到较广泛的关注和应用，但在蜜蜂相关疾病治疗方面的应用却未见报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种抗蜜蜂幼虫芽孢杆菌卵黄抗体。

本发明的再一目的在于提供上述卵黄抗体的制备方法。

本发明的再一目的在于提供上述卵黄抗体的应用。

根据本发明具体实施方式的抗蜜蜂幼虫芽孢杆菌卵黄抗体，所述卵黄抗体为利用灭活蜜蜂幼虫芽孢杆菌卵抗原免疫产蛋鸡，收集所述免疫蛋鸡的鸡蛋，并从免疫鸡蛋卵黄中分离和纯化得到。

根据本发明具体实施方式的抗蜜蜂幼虫芽孢杆菌卵黄抗体，所述卵黄抗体有包括以下步骤的方法制备得到：

(1)制备抗原：将蜜蜂幼虫芽孢杆菌灭活，作为抗原；

(2)免疫蛋鸡：将灭活的蜜蜂幼虫芽孢杆菌与棒状纳米氢氧化铝按照质量比为1：0.5～1.5混合乳化后，首次免疫产蛋鸡，再进行第二次、第三次加强免疫，收集鸡蛋；其中，棒状纳米氢氧化铝为长径800～1000纳米、短径200～300纳米的棒状氢氧化铝；

(3)分离纯化卵黄，得到卵黄抗体。