[发明专利]一种免核酸提取的灭活型病毒保存液及其应用

说明书

本发明提供了一种免核酸提取的灭活型病毒保存液及其应用，具体地本发明的病毒样本保存液中包含蛋白酶K、氢氧化钠、β‑丙内酯、明胶等组分，通过各组分的协同的配合能够在室温条件下有效释放和保存病毒核酸，并在样本常温运输和保存过程中有效防止核酸降解，可用于制备临床病毒核酸样本。

技术领域

本发明属于分子诊断领域，具体地说，本发明涉及一种免核酸提取的灭活型病毒保存液及其应用。

背景技术

2019年底爆发的病毒感染性肺炎(COVID-19)对全球人民健康造成巨大威胁，并造成重大经济损失。快速、准确的病原诊断是有效治疗、病情监测和控制疾病蔓延的重要前提。目前，通过实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)筛查和确诊病患是新冠肺炎防控的主要手段。如何保证核酸检测结果的及时性和准确性对当前疫情防控具有非常重大的意义。

RNA病毒的核酸由于自降解和生物酶导致的降解，是最难以稳定保存的生物分子之一。因此，样本的保存和运输通常是决定RNA病毒样本质量的关键因素。含有RNA病毒的样本建议存放于专用的病毒保存液中，且必须在冷藏状态下(即4℃或更低温度)保存并尽快运输送检。在烈性传染的病原核酸临床检测中，临检人员在检验操作过程中容易带来传染病原实验室暴露感染的威胁，需要采取严格的防护设备和措施以降低临检人员感染风险。因此，如何在保护临检人员安全的基础上有效保存、运输病原样本，并保证后续核酸检测结果的准确性，临床上对病原核酸样本采集和保存提出了更高的要求。

此外，由于病毒保存主要是解决样本保存和运输中的问题，后续检测是以病毒核酸分离提取为前提，样本在实施PCR等核酸检测之前需要经过样本消化裂解、吸附纯化、洗涤收集等多个步骤以除去样本中的蛋白变性剂、去垢剂等裂解试剂，对于单个样本的处理往往耗时数十分钟，需要对大量样本进行处理时，耗时甚至比PCR检测反应更长，另外，由于繁多的操作步骤，在大样本处理过程中，也增加了样本之间相互污染的几率。

针对以上病毒保存过程中涉及到的样本核酸保存、病毒灭活、后续直扩问题，本实验室研发专利CN111334503A“一种核酸保存液”中提供了一种灭活型病毒保存液，能够灭活病原微生物，并可以在常温下有效防止核酸的降解，延长核酸的保存时间，保证病毒样本采集、运输、检测的安全性和稳定性，有效解决了病毒灭活和核酸常温运输保存的问题。但是，保存液保存的样本仍需经过核酸提取步骤，不适用于进行直接RT-PCR扩增检测。本实验室研发的另外一个专利CN111925941A“一种病毒保存液及其应用”公布了一种免核酸提取的病毒保存液，能够在常温运输和保存以及高温灭活病毒处理过程中有效保证病毒核酸免遭降解，并且保存液中不含PCR抑制剂，可免核酸提取操作，直接作为样本模板进行后续(RT-)PCR核酸检测实验。但是，该保存液不能完全有效灭活病毒等病原微生物，因此样本在进行核酸检测之前，需要进行高温(50-60℃)灭活处理的步骤，以保证实验操作人员的安全。

因此，本领域技术人员致力于开发一种既能有效灭活病毒，又能免核酸提取的病毒保存液。

发明内容

本发明的目的在于提供一种免核酸提取的灭活型病毒保存液及其应用。

在本发明的第一方面，提供了一种病毒样本保存液，所述保存液包括蛋白变性剂、灭活剂、和稳定剂；其中，

所述蛋白变性剂包括选自下组的一种或两种成分：蛋白酶K和氢氧化钠；

所述灭活剂包括选自下组的一种或两种成分：β-丙内酯和Proclin-300；

所述稳定剂包括选自下组的一种或两种成分：明胶和PEG8000。

在另一优选例中，所述保存液还包括非离子型表面活性剂；优选地，所述非离子型表面活性剂包括选自下组的一种或多种成分：Triton-100、吐温20、吐温80、和NP-40。