[发明专利]肿瘤来源外泌体在制备促进破骨分化和骨溶解药物中的用途

说明书

本发明属于细胞生物学技术领域，公开了一种外泌体在制备促进破骨分化和骨溶解药物中的用途，骨靶向的前列腺癌外泌体的制备方法包括：分离培养前列腺癌细胞，待细胞融合至70％时，将培养的细胞转移提前收集的无外泌体血清处理的条件培养基中；继续培养48小时；待细胞融合至90％时，收集条件培养上清；采用差速离心的方法分离得到前列腺癌细胞来源外泌体。本发明有效分离制备得到了前列腺癌细胞外泌体，并验证发现前列腺癌细胞外泌体能够靶向骨并与骨基质细胞结合，从而引起体外破骨分化和体内溶骨性改变，导致病理性骨重构，并最终促进肿瘤在骨内的生长。

技术领域

本发明属于细胞生物学技术领域，尤其涉及一种肿瘤来源外泌体在制备促进破骨分化和骨溶解药物中的用途。

背景技术

目前，外泌体是由多种细胞分泌的直径介于30-150nm的细胞外囊泡，具有脂质双分子层。现有研究证实，外泌体在细胞间和器官间信号传递过程中发挥重要作用。

分离出纯度高、生物活性好、适用于下游检测目的外泌体是外泌体研究面临的首要难点。依据2018国际囊泡协会(International Society of Extracellular Vesicles,ISEV)的指南MISEV2018，目前,外泌体的分离方法有多种(超速离心法、蔗糖密度梯度离心法以及聚乙二醇沉淀法等)，尚无统一标准；但是每种分离方法都存在一定的不足：超速离心法分离外泌体纯度高但得率低，且需要专门设备，但因其纯度高，目前仍是外泌体功能研究的首选方法；蔗糖密度梯度离心法前期准备工作繁琐，耗时长，获得的外泌体数量少；聚乙二醇沉淀法虽然有很高的外泌体得率，但因沉淀过程中引入杂质，不能满足后续外泌体内含物分析的要求。

肿瘤转移是肿瘤病人预后不良的最主要原因，但肿瘤转移的机制尚未完全清楚。早在1889年，Stephen Paget就提出了肿瘤转移的“种子-土壤”假说，该假说认为：肿瘤的转移并不是随机发生的，肿瘤细胞更易在特定的靶器官上发生转移。2015年，美国康奈尔大学David Lyden教授团队率先报道，外泌体的整合素决定了肿瘤转移的器官特异性。现有研究已经证实，在肿瘤转移过程中，外泌体能够先于肿瘤细胞到达转移部位，教化转移前微环境，形成肿瘤前转移龛，为肿瘤转移创造土壤。骨作为全身最坚硬的器官，是晚期前列腺癌最常见的转移部位。但骨作为前列腺癌转移靶器官的机制尚不清楚。

与乳腺癌骨转移、肺癌骨转移等不同，前列腺癌被认为是唯一发生成骨性骨转移的肿瘤。现有研究已经证实，前列腺癌外泌体传递的hsa-miR-141-3p和hsa-miR-940能够体外促进成骨细胞分化和成骨性骨转移，但是前列腺癌外泌体自身在骨平衡中的作用和机制尚未清楚。外泌体因其体积小、器官靶向性高、来源于生物本身而非自身合成，目前已经被认为是治疗多种疾病的有效药物载体。据此，骨靶向的外泌体十分有望成为多种骨相关疾病的治疗靶点或药物载体。但是，能够靶向骨的外泌体尚未见报道。通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：

(1)分离骨靶向的外泌体尚未见报道；

(2)前列腺癌外泌体在前列腺癌与骨交互对话中的作用和机制不清楚

解决以上问题及缺陷的难度为：尚不明确哪种细胞的外泌体能够靶向骨，从而为骨疾病的外泌体治疗方式提供可行性；前列腺癌易发生骨转移，但是前列腺癌外泌体是否能够在体内分布于骨，并通过一定的机制发挥相应功能尚不清楚。

解决以上问题及缺陷的意义为：

明确前列腺癌外泌体能够靶向骨及其在骨平衡中的功能，为开发以外泌体为骨疾病治疗靶点的相关研究奠定基础和技术方法。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种肿瘤来源外泌体在制备促进破骨分化和骨溶解药物中的用途。

本发明是这样实现的，一种骨靶向的前列腺癌外泌体在制备促进破骨分化和骨溶解药物中的用途。

所述骨靶向的前列腺癌外泌体剂量为10ug。