[发明专利]一种TERT启动子甲基化的检测引物组合物及其应用在审
| 申请号： | 202110031530.2 | 申请日： | 2021-01-11 |
| 公开（公告）号： | CN112662773A | 公开（公告）日： | 2021-04-16 |
| 发明（设计）人： | 邓务国;龙谦;肖比苍 | 申请（专利权）人： | 湖南灵康医疗科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6886 | 分类号： | C12Q1/6886;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京精金石知识产权代理有限公司 11470 | 代理人： | 王洋 |
| 地址： | 410000 湖南省长沙市高新技术*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 tert 启动子 甲基化 检测 引物 组合 及其 应用 | ||
1.一种TERT启动子甲基化的检测引物组合物，其特征在于，所述的引物组合物为cg11625005-F、cg11625005-Rbio和cg11625005-S，所述的cg11625005-F核苷酸序列如SEQID NO:1所示，所述的cg11625005-Rbio核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，所述的cg11625005-S核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。
2.权利要求1所述的引物组合物在制备TERT启动子甲基化检测工具中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的工具包括但不限于单独试剂、试剂盒。
4.权利要求1所述的引物组合物在制备肾癌检测工具中的应用。
5.一种TERT启动子甲基化的检测工具，其特征在于，所述的工具包括上述引物探针组合。
6.一种TERT启动子甲基化位点在制备肾癌检测工具中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的TERT启动子甲基化位点为cg11625005，所述的cg11625005位于启动子上游554bp处。
8.一种非疾病性的检测TERT启动子甲基化的方法，其特征在于，所述的方法包括以下步骤：
(1)样本DNA提取；
(2)对步骤(1)提取的DNA进行转化、纯化；
(3)对步骤(2)纯化得到的DNA进行扩增；
(4)焦磷酸测序。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的提取的DNA的浓度大于50ng/μL，样本的总量大于500ng。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述的扩增的反应体系为：10×EpiTap PCR Buffer 2.5μL，25mM MgCl22.5μL，1-羧基-N,N,N-三甲氨基乙内酯50mM，N-(2-羟乙基)哌嗪-N'-3-丙磺酸5mM，dNTP Mixture 3μL，EpiTap HS 0.125μL，Pfu DNAPolymerase 0.125μL，Fw引物1μL，Rv引物1μL，转化后的DNA模板20μL，加水至25μL；所述的扩增的反应程序为：98℃10s，55℃30s，72℃30s，40cycles；72℃，1min；4℃，hold。
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