[发明专利]新型冠状病毒质控品、其制备方法及用途

说明书

本发明涉及一种质控品，包括：第一假病毒，其含有如SEQ ID NO:1所示的核酸片段；第二假病毒，其含有如SEQ ID NO:2所示的核酸片段；和第三假病毒，其含有如SEQ ID NO:3所示的核酸片段。该质控品用于评价多种SARS‑CoV‑2核酸检测试剂盒。本发明还涉及核酸组合物、核酸构建体的组合物、制备质控品的方法、试剂盒及用途。

技术领域

本发明涉及新型冠状病毒的核酸检测领域，具体涉及核酸检测的质控品。

背景技术

新型冠状病毒(SARS-CoV-2)属于β属冠状病毒，有包膜，由RNA核酸和蛋白质组成，RNA链约含29000个碱基，是目前已知的第7种可以感染人的冠状病毒。SARS-CoV-2与急性呼吸综合征病毒(SARS-CoV)、中东呼吸综合征病毒(MERS-CoV)属同一家族，目前与其最接近的是蝙蝠SARS样冠状病毒(bat-SL-CoVZC45)，有85％以上的同源性。SARS-CoV-2 基因组含有12个蛋白编码区或开放读码框(ORF)；其中ORF1ab为RNA依赖的RNA聚合酶基因(RdRp)所在区域，编码RNA聚合酶、负责病毒核酸复制；S区所编码的棘突蛋白与病毒感染能力相关，可与细胞表面血管紧张素转换酶2(Angiotensin-converting enzyme2， ACE2)受体结合从而进入宿主细胞；E区编码囊膜蛋白，负责病毒包膜及病毒颗粒的形成； M区编码膜蛋白；N区编码核衣壳蛋白。有研究发现SARS-CoV-2和SARS病毒入侵细胞方式相同，但其与ACE2的亲和力是SARS病毒的10～20倍，这很可能是新型冠状病毒高度传染性的原因。

SARS-CoV-2所引起的肺炎称为新型冠状病毒肺炎(COVID-19)。新冠肺炎主要传染源是病毒感染的患者和无症状携带者，主要通过飞沫和直接接触方式传播，其次也可能通过气溶胶传播，其感染人体后的潜伏期中位数为3d，最长可达24d，该病毒传染性强，潜伏期也具有传染性，人群普遍易感。感染患者以发热、干咳、乏力为主要表现，少数伴有鼻塞、咽痛和腹泻等症状。重型、危重型患者可能出现呼吸困难、急性呼吸窘迫综合征，甚至多器官功能衰竭等，老年人及有慢性基础疾病者预后较差。

由于新型冠状病毒肺炎(COVID-19)传染性强，潜伏期长，波及范围广，并且临床症状不典型，临床诊断和疫情防控困难巨大。快速准确的检测SARS-CoV-2对疾病的确诊和排查以及疫情的防控至关重要。目前实验室主要诊断方法分为病毒核酸检测、病毒基因测序以及血清学抗原抗体反应，其中SARS-CoV-2核酸检测为病毒检测的“金标准”。截至2020年3月27日，在国家药监局应急批准的23个新型冠状病毒检测产品中，新冠病毒核酸检测试剂占15个。SARS-CoV-2核酸检测包括逆转录-聚合酶链反应(reverse transcriptionpolymerase chain reaction，RT-PCR)、等温核酸扩增(recombinase polymeraseamplification，RPA)技术、依赖核酸序列扩增(nucleic acid sequence-basedamplification，NASBA)技术、环介导等温扩增(loop-mediated isothermalamplification，LAMP)技术、基于成簇的规律间隔的短回文重复序列/及其相关蛋白(clustered regularly interspaced short palindromic repeat/CRISPR-associatedprotein，CRISPR/Cas)基因核酸检测技术、基因芯片技术、基因测序等。其中，实时荧光RT-PCR为官方推荐的检测方法。

实时荧光RT-PCR检测核酸的方法具有灵敏度高、特异性强、检测周期短、可批量化和成本低的优点。RT-PCR基本原理即根据欲检测的病毒特定保守核酸序列设计对应的高特异性引物以扩增该特定保守核酸序列，同时设计可以结合该扩增区段内部区域的Taq-man探针，探针会在扩增的过程中与扩增片段特异性结合并产生荧光信号，检测荧光达到阈值时的 Ct值，从而判断样本中是否含有SARS-CoV-2。