[发明专利]一种Ac63-64基因敲除的杆状病毒表达载体

说明书

本发明公开了一种基因敲除型杆状病毒表达载体，涉及生物技术领域。本发明将杆状病毒表达载体上相邻的两个非必需基因Ac63和Ac64同时敲除后即获得所述基因敲除型杆状病毒表达载体。本发明的基因敲除型杆状病毒表达载体使外源蛋白表达水平提高至少一倍，同时病毒的增殖特性基本不受影响。表达产量的提高能显著降低企业的生产成本。该杆状病毒表达载体可用于生物制品工业领域，特别是亚单位疫苗工业领域。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种基因敲除的杆状病毒表达载体。

背景技术

杆状病毒是特异感染节肢动物的双链DNA病毒，苜蓿银纹夜蛾多核型多角体病毒（Autographa californica nucleopolyhedrovirus, AcMNPV）是杆状病毒的模式种。自从1983年Smith GE等首次用杆状病毒在昆虫细胞中表达人β-干扰素基因以来（Mol CellBiol. 1983; 3:2156-65.），由于具有低成本、高产量，而且具备各种翻译后修饰系统等优点，杆状病毒表达载体系统在科研和生产中被广泛应用。

然而，相较于工业上普遍使用的原核表达系统（大肠杆菌、枯草芽孢杆菌）和酵母表达系统，杆状病毒表达载体系统的产量还不尽人意，这导致杆状病毒表达系统的生产成本居高不下。

因此，需要研究特定的技术手段以提高上述表达载体系统的产量。

发明内容

本发明的目的在于提供一种基因敲除的高产重组杆状病毒载体，旨在解决背景技术提及的表达量低的问题。

为达到上述目的，本发明主要提供了如下技术方案：

一方面，本发明实施例提供了一种基因敲除的杆状病毒表达载体，将杆状病毒AcMNPV表达载体上相邻的两个非必需基因Ac63和Ac64同时敲除后即获得所述基因敲除的杆状病毒表达载体。

作为优选，所述Ac63的敲除是指所述Ac63的启动子区被破坏或所述Ac63的编码区被破坏或所述Ac63的启动子区与其编码区被同时破坏或所述Ac63的3’UTR被破坏。

作为优选，所述Ac64的敲除是指所述Ac64的启动子区被破坏或所述Ac64的编码区被破坏或所述Ac64的启动子区与其编码区被同时破坏。

另一方面，本发明提供了一种重组蛋白，用所述新型杆状病毒表达载体构建重组病毒，然后感染昆虫宿主细胞，所述宿主细胞经过培养、增殖并表达为重组蛋白，即获得所述重组蛋白。

又一方面，本发明提供了所述新型杆状病毒表达载体在生物制品工业上的应用。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

本发明在研究时发现杆状病毒基因组中存在大量非必需基因，并且一些非必需基因彼此相邻成簇存在，这些成簇存在的非必需基因（含未知功能基因）包括Ac63和Ac64相邻的两个基因；本发明在同时Ac63和Ac64后，发现蛋白表达水平显著提高、病毒的增殖水平没有明显变化，其说明本发明通过上述敲除技术可以提供一个具有优良生产性状和高产特性的杆状病毒表达载体。

附图说明

图1 本发明提供的杆状病毒载体的基因敲除策略示意图；

图2 使用本发明提供的杆状病毒载体表达的荧光素酶FluC全细胞蛋白电泳图；

图3 使用本发明提供的杆状病毒载体表达的绿色荧光蛋白GFP总荧光强度柱状图；

图4 本发明提供的杆状病毒载体的一次生长曲线。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。