[发明专利]合成番茄红素的酿酒酵母基因工程菌及其构建方法与应用

权利要求书

1.合成番茄红素的酿酒酵母基因工程菌，其特征在于，在酿酒酵母中表达来源于Deinococcus wulumuqiensis R12的crtI基因，或者在酿酒酵母中共同表达来源于Deinococcus wulumuqiensis R12的crtE基因和crtB基因，或者在酿酒酵母中共同表达来源于Deinococcus wulumuqiensis R12的crtE基因、crtB和crtI基因；

所述的crtE的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；

所述的crtB的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；

所述的crtI的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

2.权利要求1所述的合成番茄红素的酿酒酵母基因工程菌的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将crtI基因连接到酵母表达质粒中，得到pESC-I重组质粒；或者将连接了组成型强启动子P_TDH3的crtI基因连接到酵母表达质粒中，得到pESC-CI重组质粒；

(2)去除crtE基因的终止密码子，并在crtE基因后连接link序列和crtB基因，得到重组片段Ⅰ，将重组片段Ⅰ连接到pESC-I重组质粒中，得到pEBI重组质粒；

或者，去除crtE基因的终止密码子，将组成型强启动子P_TDH3、crtE基因、link序列以及crtB基因依次连接，得到重组片段Ⅱ，然后将重组片段Ⅱ连接到pESC-CI重组质粒中，得到pCEBI重组质粒；

将组成型强启动子P_TDH3、crtE基因、终止子T_CYC1、组成型强启动子P_TDH3、以及crtB基因依次连接，得到重组片段Ⅲ，然后将重组片段Ⅲ连接到pESC-CI重组质粒中，得到pCIETB重组质粒；

(3)将步骤(2)得到的重组质粒pEBI、pCEBI或pCIETB转化酿酒酵母菌，得到合成番茄红素的酿酒酵母基因工程菌。

3.根据权利要求2所述的合成番茄红素的酿酒酵母基因工程菌的构建方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的表达质粒为pESC-LEU、pESC-HIS、pESC-TRP或pESC-URA。

4.根据权利要求2所述的合成番茄红素的酿酒酵母基因工程菌的构建方法，其特征在于，步骤(2)中，所述终止子T_CYC1的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

5.根据权利要求2所述的合成番茄红素的酿酒酵母基因工程菌的构建方法，其特征在于，步骤(2)中，所述强启动子P_TDH3的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。

6.根据权利要求2所述的合成番茄红素的酿酒酵母基因工程菌的构建方法，其特征在于，步骤(3)中，所述的酿酒酵母菌为酿酒酵母YPH499或酿酒酵母BY4741。

7.权利要求1所述合成番茄红素的酿酒酵母基因工程菌在发酵制备番茄红素中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，以SP-Leu培养基的发酵培养基，以权利要求1所述的合成番茄红素的酿酒酵母基因工程菌为发酵菌株，发酵制备番茄红素。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，在培养基中加入脂肪酸，所述的脂肪酸为棕榈油酸、油酸、亚油酸、亚麻酸中的一种或几种的混合物。

10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述SP-Leu培养基的配方为：20g/L蛋白胨，20g/L葡萄糖，0.69g/L CSM-Leu；

所述发酵的发酵温度为28℃、发酵时间为36h。