[发明专利]荧光定量的指标确定方法有效
| 申请号: | 202110025425.8 | 申请日: | 2021-01-08 |
| 公开(公告)号: | CN112342282B | 公开(公告)日: | 2021-03-30 |
| 发明(设计)人: | 李冬;杨智;贺贤汉 | 申请(专利权)人: | 杭州博日科技股份有限公司 |
| 主分类号: | C12Q1/6851 | 分类号: | C12Q1/6851 |
| 代理公司: | 杭州创智卓英知识产权代理事务所(普通合伙) 33324 | 代理人: | 张超 |
| 地址: | 310053 浙江省杭州*** | 国省代码: | 浙江;33 |
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | 荧光 定量 指标 确定 方法 | ||
1.一种荧光定量的指标确定方法,其特征在于,包括:
采集第一数量个循环对应的初始荧光定量PCR扩增数据;所述第一数量个循环为所有循环;
对所述第一数量中前第二数量个循环对应的初始PCR扩增数据进行线性拟合,确定扩增曲线基线;
对所述初始PCR扩增数据去基线,得到目标PCR扩增数据;
针对所述第一数量中除前第二数量以外的后第三数量个循环对应的目标PCR扩增数据,确定所述第三数量个循环对应的目标PCR扩增数据中荧光强度连续递增的第四数量个循环;
针对所述第四数量个循环对应的目标PCR扩增数据取对数;
根据Savitzky-Golay拟合原理及循环总数,确定窗口大小选择范围;所述窗口大小选择范围为3~N/4范围内奇数值,其中N为循环总数;
在选择范围中依次确定当前窗口大小,针对每个所述当前窗口大小,在所述当前窗口大小对应的每一个滑动平移位置,计算决定系数;以及取所述当前窗口大小中最大的决定系数其对应初始窗口为所述当前窗口大小对应的最优指数区域;
根据每个所述当前窗口大小对应的最优指数区域对应的循环C,确定循环C中的众数,设为Cz,取Cz对应的满足决定系数基本阈值的最大当前窗口大小对应的最优指数区域选为目标指数区域;其中,所述满足决定系数基本阈值具体为满足决定系数大于0.95;若每个所述当前窗口大小对应的循环C均不同,则取最大决定系数对应的循环C设为Cz,Cz对应的最优指数区域选为目标指数区域;
根据所述目标指数区域确定PCR的指标,其中,所述PCR的指标包括Ct值,所述Cz值即为Ct值。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述PCR的指标还包括初始拷贝数目以及扩增效率;根据所述目标指数区域确定所述PCR的指标的步骤还包括:
根据所述目标指数区域确定初始拷贝数目;
根据所述目标指数区域确定扩增效率。
3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述根据所述目标指数区域确定初始拷贝数目的步骤,包括:
确定目标指数区域对应的线性拟合截距
根据公式,计算得到初始拷贝数目
4.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述根据所述目标指数区域确定扩增效率的步骤,包括:
确定目标指数区域对应的线性拟合斜率
根据公式,计算得到扩增效率
5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述第四数量个循环为所述第三数量个循环中具有3个连续递增循环中初始循环之后的所有循环。
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