[发明专利]抗猪IgG单克隆抗体及其应用

说明书

本发明提供了一种抗猪IgG单克隆抗体，包括SEQ ID NO：1和／或SEQ ID NO：2。所述单克隆抗体在抗体效价、交叉反应性和特异性等方面均有上佳表现，适合作为猪免疫诊断和抗体检测试剂。

技术领域

本发明属于生物领域，涉及抗猪IgG单克隆抗体，以及分泌所述单克隆抗体的杂交瘤细胞，以及所述单克隆抗体的应用。

背景技术

IgG是动物血清中浓度最高的一类免疫球蛋白，约占免疫球蛋白含量的70％-80％，在抗体介导的反应中起主要作用，同时血清中特异性IgG水平也是临床免疫检验和体液免疫研究的常用指标，因此免疫学检测是疾病诊断和抗体检测最基本的方法。研制和开发的猪病免疫诊断和抗体检测试剂中(ELISA、WB、免疫荧光法、胶体金试纸等)，第二抗体是最重要的材料，第二抗体质量的好坏直接影响检测方法的敏感性、特异性和稳定性。

目前，市面上供应的用于猪病检测试剂中的抗猪IgG重链、轻链抗体基本是多克隆抗体，多克隆抗体能够在一定程度上检验猪病，但由于多克隆抗体血清成分复杂，批间抗体质量和酶标效率差异很大，难以实现标准化生产。单克隆抗体具有纯度高、专一性强、效价好等优点，可以克服多克隆抗体的缺陷。市面上的单克隆抗体多通过猪IgG蛋白作为抗原免疫获得，但由于猪与人、鼠等物种的IgG Fc片段的同源性较高，此类单克隆抗体的特异性不强，易与其它物种IgG发生交叉反应。因此，研制出抗猪免疫球蛋白重链、轻链的单克隆抗体作为模式猪的开发及猪病免疫诊断检测工具具有广泛应用。

发明内容

本发明目的是提供一种抗猪IgG单克隆抗体。所述抗体在抗体效价、交叉反应性和特异性等方面均有上佳表现，适合作为猪病免疫诊断和抗体检测试剂。

一种抗猪IgG单克隆抗体，包括SEQ ID NO：1和/或SEQ ID NO：2。所述SEQ ID NO：1为IgG重链抗体，SEQ ID NO：2为Igκ轻链抗体。所述单克隆抗体能够与猪IgG重链、轻链特异性结合，而不与人IgG、狗IgG、兔IgG、羊IgG、牛IgG和马IgG结合。

本发明第二目的在于提供了上述单克隆抗体的应用。

上述单克隆抗体在制备猪病免疫诊断和/或抗体检测试剂中的应用。

优选的，所述抗体检测试剂是指抗体检测试剂中的第二抗体。

本发明第三目的在于提供了上述抗体的杂交瘤细胞株。

一种杂交瘤细胞株，分泌上述SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2。

本发明另一目的在于提供了上述杂交瘤细胞株的制备方法。

上述单克隆抗体的制备方法，包括SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2作为抗原免疫Balb/c小鼠，利用杂交瘤电融合、半固体筛选，从得到的众多克隆中筛选到能稳定分泌抗猪IgG重链、轻链单克隆抗体的杂交瘤细胞株。其中，分泌抗猪IgG重链单克隆抗体(SEQ ID NO：1)的杂交瘤细胞株记作5-H8-1，分泌抗猪IgG轻链单克隆抗体(SEQ ID NO：2)的杂交瘤细胞株记作13-B2-1D3。

有益效果

首先，本发明提供的单克隆抗体，能够分别与猪IgG重链、轻链结合，具有较高的效价；其次，本发明的单克隆抗体与人IgG、狗IgG、兔IgG、羊IgG、牛IgG和马IgG无交叉反应，具有很好的特异性结合能力；最后，在蛋白质免疫印迹实验中表明本发明的单克隆抗体可用抗体检测试剂中的第二抗体。也就是说，本发明的单克隆抗体在抗体效价和交叉反应性方面展现出了很好的性能，从而本发明提供了能够用于猪病免疫诊断和抗体检测试剂的抗猪IgG重链、轻链的单克隆抗体。

附图说明

图1示出了本发明真核表达纯化后的抗猪轻链单克隆抗体SDS-PAGE电泳图