[发明专利]鸡白痢/鸡伤寒沙门菌TaqMan探针荧光定量PCR检测方法的引物和探针的组合物

说明书

本发明公开了一种鸡白痢/鸡伤寒沙门菌TaqMan探针荧光定量PCR检测方法的引物和探针的组合物、试剂盒及其应用，涉及生物技术领域，其中：引物包括上游引物和下游引物，上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；检测速度快，特异性强、检测灵敏且检测稳定。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种鸡白痢/鸡伤寒沙门菌TaqMan探针荧光定量PCR检测方法的引物和探针的组合物、试剂盒及其应用。

背景技术

沙门菌病是当前我国养禽业中存在的一种重要细菌性疾病，通常包括由鸡白痢沙门菌引起的鸡白痢、鸡沙门菌引起的鸡伤寒以及由其它某些特定血清型沙门菌引起的禽副伤寒。不同日龄家禽感染沙门菌的临床表现各有差异，幼雏的早期感染常会引起很高的发病率和死亡率，而成年家禽的发病率和死亡率则明显较低，大多表现为隐性感染长期带菌，并可垂直传播，因而种禽带菌是幼雏早期感染的一个主要因素。

一般情况下畜禽肠道带菌率比较高，当动物因患病、衰弱、营养不良、疲劳以致抵抗力降低时，肠道中的沙门菌即可经肠系膜淋巴结和组织进入血液引起全身感染，甚至死亡。

鸡白痢病是鸡场常见传染病之一，分布较广、危害较大，由鸡白痢沙门菌引起，可造成雏鸡20％～30％的死亡率，甚至更高。鸡白痢沙门菌主要侵害雏鸡，引起败血症，可造成大批死亡。在成年母鸡则主要引起孵巢炎，可在卵黄内带菌而传给幼雏。鸡伤寒是由鸡伤寒沙门菌引起的，鸡伤寒沙门菌可感染任何日龄的鸡。主要症状是体温升高，排黄绿色稀粪。鸡伤寒呈世界性分布，死亡率可达10％-50％或更高。

随着理论的发展，沙门菌的检测方法和鉴定技术在不断地发展和完善。传统检测方法可参照《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门菌检验》(GB4789.4—2016)和《感染性腹泻诊断标准》(WS 271—2007)，操作繁琐、时间长，并且可靠性敏感性不高。免疫学检测方法则包括酶联免疫吸附、免疫胶体金技术、免疫磁珠分离技术等等，原理是利用抗原-抗体之间的特异性反应对目标物质进行检测，操作简单且特异性强，但抗体的制备周期长、成本高。此外分子生物学检测技术还包括环介导等温扩增技术(LAMP)，但该方法对引物设计要求较高。目前已有报道多种沙门菌PCR检测方法的建立及应用，PCR方法操作简便快速、特异性好，但相较于荧光定量PCR，常规PCR检测周期更长，操作也更繁琐。

现有技术中亟需一种简捷方便、灵敏性高、特异性强、检出结果可靠的鸡白痢/鸡伤寒沙门菌的检测方法。

发明内容

针对现有的鸡白痢/鸡伤寒沙门菌采用上述传统检测方法、免疫学检测方法以及常规PCR检测方法各自存在的问题，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了鸡白痢/鸡伤寒沙门菌TaqMan探针荧光定量PCR检测方法的引物和探针的组合物，引物包括上游引物和下游引物，其中上游引物具有如下所示的核苷酸序列中的任意一项：I、具有SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列；

II、具有SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列经修饰、取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列；

III、与SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列具有至少80％同源性的序列；

IV、如I、II或III所示序列的互补序列。

其中下游引物具有如下所示的核苷酸序列中的任意一项：V、具有SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列；

VI、具有SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列经修饰、取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列；

VII、与SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列具有至少80％同源性的序列；

VIII、如V、VI或VII所示序列的互补序列。