[发明专利]一种双胞旋沟藻细胞核增殖抗原基因及其应用

说明书

本发明涉及基因工程领域，具体涉及一种双胞旋沟藻细胞核增殖抗原基因及其应用。其中，所述细胞核增殖抗原基因扩增长度为430bp，其核苷酸序列为SEQ NO.1。在应用方面，构建该基因的氨基酸序列(SEQ ID NO:2)系统发育树，可为研究甲藻的系统发育提供蛋白质方面的证据，探索该基因在溶藻菌上清液胁迫下的表达量变化，为研究非生物胁迫响应打下基础，进而为探究海洋藻类的死亡机理提供基因来源与技术支持。

技术领域

本发明涉及基因工程领域，具体涉及一种双胞旋沟藻细胞核增殖抗原基因及其应用。

背景技术

从藻类中克隆出目的基因最常用的方法是PCR扩增克隆法，即在已知藻株目的基因序列的基础上，进行基因序列克隆的一种方法。先从基因文库(GenBank)中找到有关基因序列，据此合成寡聚核苷酸引物，从生物体中提取DNA或RNA，进行PCR扩增，扩增的目的片段纯化后插入到合适的质粒载体上，用酶切分析和序列分析检测重组子，并与已知基因序列比较，以获得目的基因。该技术的优点在于对已知序列的基因进行扩增是基因克隆方法中最为简便的一种，即将别人报道的基因序列直接作为自己克隆的依据，但旋沟藻的细胞核增殖抗原基因(pcna)还未曾被报道过，没有准确的参考序列以及PCR扩增方法，在双胞沟藻上扩增目的基因序列就尤为艰难，不仅需要从海量的数据库中查找相近物种的细胞核增殖抗原基因序列(pcna)作为依据，还需探究扩增克隆出该基因的方法。

已有研究表明，在甲藻中，pcna基因的拷贝数与基因组大小呈较强的正相关关系。细胞快速分裂是浮游植物种群发展和扩大的重要决定因素之一，因此，与增殖状态相关的功能基因pcna可成为赤潮爆发藻快速生长的有用监测物，研究发现pcna基因的表达与某些藻生长速率呈正相关的关系，pcna作为一种潜在的分子标记物，可以用来估计浮游植物的生长速率。另外，蛋白质序列的进化式样较DNA序列简单，用于探讨系统发育的效果更好，有研究表示pcna氨基酸序列具有其基因家族特有的保守基序，在不同类群的生物体中具有保守功能，可为研究甲藻的系统发育提供蛋白质方面的证据。

发明内容

因此，本发明要解决的技术问题在于现有技术中的旋沟藻的细胞核增殖抗原基因(pcna)还未曾被报道过，没有准确的参考序列以及扩增方法，在双胞旋沟藻上扩增目的基因序列更为艰难，从而提供一种核酸分子，生物材料，引物对，一种扩增藻细胞核增殖抗原基因的方法，蛋白片段，蛋白片段在甲藻的系统发育中的应用，核酸分子、生物材料、或引物对在制备胁迫条件下藻pcna基因表达量变化的产品中的应用。

本发明提供一种核酸分子，所述核酸分子的核苷酸序列为SEQ NO.1。

如下任一所述生物材料，为下述A1)至A7)中的任一种：

A1)含有权利要求1所述核酸分子的表达盒；

A2)含有权利要求1所述核酸分子的重组载体；

A3)含有A1)所述表达盒的重组载体；

A4)含有权利要求1所述核酸分子的重组微生物；

A5)含有A1)所述表达盒的重组微生物；

A6)含有A2)所述重组载体的重组微生物；

A7)含有A3)所述重组载体的重组微生物。

一种引物对，由上游引物和下游引物组成，所述上游引物的核苷酸序列如SEQ IDNO:3所示，所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。

一种扩增藻细胞核增殖抗原基因的方法，以旋沟藻属的基因组DNA或cDNA为模板，用引物对进行PCR；PCR扩增体系中上游引物和下游引物的浓度均为5uM-10uM；PCR反应程序：预变性：95℃，5min；95℃，30s；60℃，30s；72℃，40s；35个循环；延伸：72℃，10min。