[发明专利]一种基于人工囊泡的分子信标原位检测冠状病毒核酸的方法

权利要求书

1.一种用于原位检测病毒核酸的人工囊泡，其特征在于，所述人工囊泡由下述步骤制备而成：提取经转染ACE2基因后的高表达ACE2蛋白的细胞质膜，将其与特异性检测冠状病毒RNA核酸的分子信标制备成包埋分子信标的人工囊泡，所述病毒是冠状病毒；

其中，所述包埋分子信标的人工囊泡通过将所述细胞质膜与所述分子信标的溶液混合后通过脂质体挤出器共挤形成；

所述分子信标是针对冠状病毒的基因ORF1ab、基因N和基因E设计的。

2.如权利要求1所述的人工囊泡，其特征在于，所述细胞质膜的制备方法如下：取所述细胞用EDTA处理，离心去上清，加入低渗缓冲液，细胞液在冰中放置3-10min，然后40-45℃放置60-120s，重复2-4次；然后对细胞液进行研磨1-2次，离心得到的上清液于超滤管中，离心获得高表达ACE2蛋白的细胞质膜溶液。

3.如权利要求1所述的人工囊泡，其特征在于，所述细胞质膜的制备方法是：取所述细胞，吸出培养基，用PBS缓冲液清洗后吸出，用EDTA处理30-60分钟，转移至离心管中离心去掉上清，重复离心1-2次，加入低渗缓冲液；将细胞液在冰中放置3-8min，然后40-45℃放置60-120s，重复2-4次；将细胞液放在冰上，用匀浆器抽提10-30次，离心后，向含细胞沉淀中加入低渗缓冲液，重复研磨一至二次，将各次离心后的上清合并即得，进一步地，对上述上清液于20000g离心20min；再将离心后的上清放到100K的超滤管中，6000g离心10min即得。

4.如权利要求1所述的人工囊泡，其特征在于，所述分子信标溶液是含有所述多种分子信标的混合溶液。

5.如权利要求4所述的人工囊泡，其特征在于，所述分子信标溶液的制备是将含各分子信标的TE缓冲液等比例混合。

6.如权利要求1所述的人工囊泡，其特征在于，将细胞质膜溶液与分子信标溶液混合，用脂质体挤出器反复共挤10-30次，形成包埋分子信标的人工囊泡。