[发明专利]一种CGF和脐带间充质干细胞外泌体混合物、制备及应用

权利要求书

1.一种CGF和脐带间充质干细胞外泌体混合物，其特征在于，所述混合物包括脐带间充质干细胞外泌体、CGF和磷酸盐溶液，所述的脐带间充质干细胞外泌体、CGF和磷酸盐溶液的体积比为2:(0.5～1):(2～4)。

2.根据权利要求1所述的一种CGF和脐带间充质干细胞外泌体混合物，其特征在于，所述混合物还包括透明质酸，所述的脐带间充质干细胞外泌体、CGF、磷酸盐溶液和透明质酸的体积比为2:(0.5～1):(2～4):1。

3.根据权利要求1或2所述的一种CGF和脐带间充质干细胞外泌体混合物，其特征在于，所述脐带间充质干细胞外泌体的浓度为3μg/ml～8μg/ml。

4.根据权利要求1或2所述的一种CGF和脐带间充质干细胞外泌体混合物，其特征在于，所述CGF的浓度为40ng/ml～120ng/ml。

5.根据权利要求1或2所述的一种CGF和脐带间充质干细胞外泌体混合物，其特征在于，分泌所述脐带间充质干细胞外泌体的脐带间充质干细胞是通过采用含有脐静脉内皮细胞外泌体的培养基培养同源脐带间充质干细胞获得。

6.根据权利要求5所述的一种CGF和脐带间充质干细胞外泌体混合物，其特征在于，所述脐带间充质干细胞是用miR-525-3p过表达腺病毒感染修饰的miR-525-3p高表达脐带间充质干细胞。

7.根据权利要求6所述的一种CGF和脐带间充质干细胞外泌体混合物，其特征在于，所述脐带间充质干细胞外泌体是通过采用含有VCAM1试剂的培养基培养所述miR-525-3p高表达脐带间充质干细胞获得。

8.一种如权利要求7所述的CGF和脐带间充质干细胞外泌体混合物的制备方法，其特征在于，包括以下制备步骤：

步骤(1)：将脐带剪切并分离，得到脐动脉、脐静脉和脐带胶质；

步骤(2)：将步骤(1)中得到的脐静脉，采用0.1％Ⅰ型胶原酶脐带静脉灌注消化法，分离得到脐静脉内皮细胞，取脐静脉内皮细胞的培养上清液，采用超速离心法，分离、提取得到脐静脉内皮细胞外泌体；

步骤(3)：将步骤(2)中得到的脐静脉内皮细胞外泌体，加入至DMEM-F12培养基中，得到含有脐静脉内皮细胞外泌体的DMEM-F12培养基；

步骤(4)：将步骤(1)中得到的脐带胶质剪碎成组织块，并加入至步骤(3)得到的含有脐静脉内皮细胞外泌体的DMEM-F12培养基中进行培养，得到第2代脐带间充质干细胞；

步骤(5)：用miR-525-3p过表达腺病毒感染步骤(4)得到的第2代脐带间充质干细胞得到miR-525-3p高表达脐带间充质干细胞；

步骤(6)：将VCAM1试剂加入至DMEM-F12培养基中，得到含有VCAM1试剂的DMEM-F12培养基；

步骤(7)：将步骤(5)得到的miR-525-3p高表达脐带间充质干细胞接种至步骤(6)得到的含有VCAM1试剂的DMEM-F12培养基中进行培养，取miR-525-3p高表达脐带间充质干细胞的培养上清液，采用超速离心法，分离、提取得到脐带间充质干细胞外泌体；

步骤(8)：采集静脉血进行差速离心，自上而下分为血清层、CGF层、分离胶层、红细胞层，吸取CGF层的液体，得到CGF液体；

步骤(9)：将步骤(7)得到的脐带间充质干细胞外泌体与步骤(8)得到的CGF液体分别加入至磷酸盐溶液中，混合均匀后得到混合溶液；

步骤(10)：将透明质酸加入至步骤(9)得到的混合溶液中，混合均匀后得到混合物。

9.一种如权利要求7所述的CGF和脐带间充质干细胞外泌体混合物的应用，其特征在于，所述混合物用于促进皮肤损伤愈合。