[发明专利]一种肝片吸虫特异抗原基因FhSAP-2及医用用途

说明书

本发明涉及一种肝片吸虫特异抗原基因FhSAP‑2及医用用途，该基因是通过肝片吸虫成虫cDNA表达文库的筛选获得。制备的检测羊等动物肝片吸虫感染胶体金试纸条具有简单、快速、无需特殊仪器设备等特点；检测结果便于判读，适于临床中快速诊断；利用间接胶体金检测方法，其中纯化的肝片吸虫FhSAP‑2抗原保证了本发明的特异性；使用金黄色葡萄球菌（SPA）进行标记，成本较低。

技术领域

本发明涉及一种肝片吸虫特异抗原基因FhSAP-2及医用用途，以及基于该基因抗原制备的检测动物肝片吸虫感染胶体金免疫层析试纸，可用于肝片吸虫感染的血清检测，属于免疫学技术领域。

背景技术

肝片吸虫病是由肝片吸虫（Fasciola hepatica）引起的一种重要的人畜共患寄生虫病，该虫宿主广泛，可寄生于牛、羊、鹿、骆驼等反刍动物，猪、马属动物及一些野生动物也可寄生，但较为少见，人也有感染的报道。该虫能引起肝炎和胆管炎，并伴有全身性中毒现象和营养障碍，危害相当严重，尤其对幼畜和绵羊，可引起大批死亡。在其慢性病程中，可使动物瘦弱，发育障碍，耕牛使役能力下降，乳牛产奶量减少，毛、肉产量减少和质量下降，病肝成为废弃物，给畜牧业经济带来巨大损失。早发现，早治疗是防控本病的关键。目前常用的检测方法有病原学和免疫学方法等。但病原学检查存在费时、费力、检出率低等缺点。免疫学检测方法如：酶联免疫吸附试验（ELISA），需要有专门的试验人员，相关的仪器设备，检测时间较长等弊端，所以不合适用于基层现场检测使用。临床上急需建立一种检测快速、适合基层推广、不需要使用仪器设备和专业操作人员的试验方法。其中免疫胶体金技术是近些年发展较快的一种快速现场检测技术，但目前我国尚无商品化羊肝片吸虫病胶体金快速检测试剂盒。此外，有关用于诊断的肝片吸虫特异基因报道较少，亟待挖掘。

发明内容

本发明公开一种肝片吸虫特异抗原基因FhSAP-2及医用用途，以及基于该基因抗原制备的检测动物肝片吸虫感染胶体金免疫层析试纸，可用于肝片吸虫感染的血清检测。

本发明所述的一种肝片吸虫特异抗原基因FhSAP-2（Fasciola hepatica SAP-2，简称：FhSAP-2）（GenBank:AYA57790.1），其基因序列如：SEQ No.1所示。

本发明所述的肝片吸虫特异抗原基因FhSAP-2的获取方法，包括以下步骤：

利用感染肝片吸虫绵羊血清对本实验室构建的肝片吸虫cDNA表达文库进行筛选；挑取阳性噬菌斑,PCR扩增后测序，对测序结果进行生物信息学分析；获得肝片吸虫特异抗原基因FhSAP-2。

利用本发明所述的利用肝片吸虫特异抗原基因FhSAP-2制备的一种检测羊肝片吸虫感染的胶体金免疫层析试纸条：通过表达纯化肝片吸虫特异基因抗原FhSAP-2蛋白，利用柠檬酸三钠还原法烧制胶体金溶液，之后利用胶体金溶液对SPA进行标记，制备金标垫，组装试纸条；包括玻璃纤维、硝酸纤维素膜（NC）、PVC底板、吸水板；金标垫上的金标抗体为金黄色葡萄球菌A蛋白（SPA），硝酸纤维素膜上的检测线（T）包被肝片吸虫FhSAP-2、质控线（C）包被兔抗SPA抗体，建立了一种间接胶体金试纸条检测方法。

本发明的积极效果在于：

提供了一种新的肝片吸虫特异抗原基因FhSAP-2（AYA57790.1）。该基因是通过肝片吸虫成虫cDNA表达文库的筛选获得。制备的检测羊等动物肝片吸虫感染胶体金试纸条具有简单、快速、无需特殊仪器设备等特点。检测结果便于判读，适于临床中快速诊断。利用间接胶体金检测方法，其中纯化的肝片吸虫FhSAP-2抗原保证了本发明的特异性。使用金黄色葡萄球菌（SPA）进行标记，成本较低。

附图说明

图1为发明肝片吸虫抗原基因免疫印迹；

图2为发明阳性噬菌体PCR扩增；

图3为发明DNA Star-Protean分析图；

图4为发明 SWISS预测蛋白三维立体图；