[发明专利]检测血液中甲基丙二酸含量的方法

说明书

本发明提供了检测血液中甲基丙二酸含量的方法，该方法包括：在一定检测条件下，利用高效液相串联质谱仪分别检测至少三个标准溶液，得到各个标准溶液的色谱图，各标准溶液中均含有浓度已知的甲基丙二酸标准品及内标物；根据各个标准溶液的色谱图拟合得到标准曲线方程；将内标工作液和血液样本混匀，加入乙腈并混匀，离心取上清液，通过加热氮吹的方式吹干上清液，吹干后加入含0‑2％甲酸和0‑20％乙腈的水溶液并混匀，离心取上清液得到待测样本；再同样检测待测样本得到其色谱图；根据待测样本的色谱图和标准曲线方程，计算血液样本中甲基丙二酸的含量。本方案提供了检测血液中甲基丙二酸含量的方法，样本前处理操作较简单，且成本较低。

技术领域

本发明涉及临床化学技术领域，特别涉及检测血液中甲基丙二酸含量的方法。

背景技术

流行病学的调查数据显示，美国和加拿大调查人群中维生素B12缺乏率约20％，拉丁美洲国家可达40％，在印度儿童中甚至可高达80％。育龄期妇女、婴幼儿和老年人是维生素B12缺乏的高危人群。维生素B12缺乏可引起血液系统、代谢与神经系统病变，尤其增加了妊娠期妇女的生育风险，并影响婴幼儿的认知能力发育。有研究证实，有些血清维生素B12轻度降低的老年人，其血清中甲基丙二酸(Methylmalonic acid，MMA，分子式为C₄H₆O₄)已明显增高，提示代谢物MMA的测定较血清维生素B12更为敏感，并且血清MMA的测定还可作为判断维生素B12补给量是否充足的标准。

目前，可以采用液相色谱质谱联用法来检测血液中甲基丙二酸的含量，其中，血液样本的前处理方法可采用衍生化处理或使用超滤离心前处理。但是，衍生化处理操作较为繁琐，而超滤离心前处理其操作虽略为简单，但超滤离心管耗材价格昂贵，造成检测成本较高。

发明内容

本发明提供了检测血液中甲基丙二酸含量的方法，样本前处理操作较简单，且成本较低。

为了达到上述目的，本发明是通过如下技术方案实现的：

本发明提供了检测血液中甲基丙二酸含量的方法，包括：

利用高效液相色谱串联质谱仪，在一定检测条件下，分别检测至少三个标准溶液，得到各个标准溶液的色谱图，其中，任一标准溶液中均含有浓度已知的甲基丙二酸标准品及内标物，不同标准溶液中甲基丙二酸标准品的浓度不同；

根据各个标准溶液的色谱图，拟合得到甲基丙二酸的标准曲线方程；

将一定量的内标工作液和一定量的血液样本混匀，再加入一定量的乙腈并混匀，离心取上清液，通过加热氮吹的方式吹干上清液，吹干后加入一定量的复溶液并混匀，离心取上清液得到待测样本，其中，内标工作液中含有浓度已知的内标物，复溶液为含0-2％甲酸和0-20％乙腈的水溶液；

利用高效液相色谱串联质谱仪，在相同检测条件下检测待测样本，得到待测样本的色谱图；

根据待测样本的色谱图和甲基丙二酸的标准曲线方程，计算血液样本中甲基丙二酸的含量。

优选地，所述将一定量的内标工作液和一定量的血液样本混匀，再加入一定量的乙腈并混匀，离心取上清液，通过加热氮吹的方式吹干上清液，吹干后加入一定量的复溶液并混匀，离心取上清液得到待测样本，包括：

用移液枪移取50-200μL血液样本于1.5mL离心管中，该血液样本为经处理至少1mL待检测血液而得到的血清或血浆，再加入一定量的内标工作液，在1000-2500rpm的转速下涡旋震荡混合20s-2min；

再加入200-800μL乙腈，在1000-2500rpm的转速下涡旋震荡混合1-5min，再在10000-12000rpm的转速下高速离心5-12min，移取上清液200-950μL至另一1.5mL离心管中；