[发明专利]检测血液中维生素K2(MK-7)含量的方法

说明书

本发明提供了检测血液中维生素K2(MK‑7)含量的方法。一定检测条件下利用高效液相串联质谱仪分别检测至少三个标准溶液，得到各标准溶液的色谱图，各标准溶液中均含有浓度已知的维生素K2(MK‑7)标准品及内标物；根据各标准溶液的色谱图拟合得到标准曲线方程；将内标工作液和取自至少100μL血液的血液样本混匀，加入无水乙醇并混匀，再加入正己烷并混匀，离心取上清液，用氮气吹干上清液后加入含0‑0.1％甲酸和5‑20％水的乙腈溶液并混匀，离心取上清液得到待测样本；再同样检测待测样本得到其色谱图；根据该色谱图和标准曲线方程计算血液样本中维生素含量。样本前处理可不涉及到SPE过程，故可降低实验成本，且血液用量少。

技术领域

本发明涉及临床化学技术领域，特别涉及检测血液中维生素K2(MK-7)含量的方法。

背景技术

维生素K又叫凝血维生素，包括K₁、K₂、K₃、K₄等几种形式，其中K₁、K₂是天然存在的，属于脂溶性维生素。所有维生素K都是在结构上相似，但侧链越长吸收越好、生物活性越高、在血液中存在时间也越长。因此，长链的甲基萘醌类(特别是MK-7)是最优质的，因为它们能几乎完全被人体吸收，并停留在血液中的时间最长。

已知最常见的成人VitK(Vitamin K，维生素K)缺乏性出血，多发生于摄入含VitK低的膳食并服用抗生素的病人中，可见于吸收不良综合征和其它胃肠疾病，如囊性纤维化、口炎性腹泻、溃疡性结肠炎等。此外，胎盘转运VitK量少、新生儿初生时体内储存量低及体内肠道的无菌状态阻碍了VitK利用、母乳中VitK含量低、新生儿吸乳量少以及婴儿未成熟的肝脏还不能合成正常数量的凝血因子等原因，使新生儿、小婴儿普遍存在低凝血酶原症。但若服用超过药理剂量的VitK2，则会导致新生儿溶血性贫血、高胆红素血症和肝中毒，在成人则可诱发心脏病和肺病。

维生素K2(MK-7)，或称Menaquinone-7、MK-7，分子式为C₄₆H₆₄O₂，是维生素K2的一个类型。在最新研究中，《阿尔茨海默病杂志》和《科学报告》上发表的论文，分别考察了钙化导致的主动脉硬化对痴呆症和视网膜动脉健康的影响。研究发现，这两种疾病的发病条件都受到活性基质Gla蛋白(MGP)的影响，而当前最有效的血管钙化抑制剂即为维生素K2(MK-7)。此外，还有研究表明MK-7具有防治骨质疏松的作用。综上，对于血液中维生素K2(MK-7)的检测具有重要的临床意义。

目前，可以采用液相色谱质谱联用法来检测血液中维生素K2(MK-7)的含量，但血液样本的前处理方法大多包括有SPE(Solid-Phase Extraction，固相萃取)过程，使得实验成本有所提高，且检测所需血液用量较大。

发明内容

本发明提供了检测血液中维生素K2(MK-7)含量的方法，血液样本的前处理方法可以不涉及到SPE过程，故可降低实验成本，且减少了血液样本用量，可更好地应用于临床检验。

为了达到上述目的，本发明是通过如下技术方案实现的：

本发明提供了检测血液中维生素K2(MK-7)含量的方法，包括：

利用高效液相色谱串联质谱仪，在一定检测条件下，分别检测至少三个标准溶液，得到各个标准溶液的色谱图，其中，任一标准溶液中均含有浓度已知的维生素K2(MK-7)标准品及内标物，不同标准溶液中维生素K2(MK-7)标准品的浓度不同；

根据各个标准溶液的色谱图，拟合得到维生素K2(MK-7)的标准曲线方程；