[发明专利]用环保洗涤剂灭活病毒的方法

说明书

本发明提供了在重组蛋白质制造领域中使用环保洗涤剂在蛋白质制造过程中灭活产品进料流中的病毒的方法，所述蛋白质旨在用于对患者施用，例如治疗性或诊断性蛋白质。本发明进一步提供方法，其中用于本发明的环保洗涤剂保持治疗性或诊断性蛋白质的产品质量，同时有效灭活病毒。

本发明涉及重组蛋白制造领域。更具体地，本发明提供了一种用于在蛋白质制造过程中灭活进料流(feedstream)中的病毒的方法，所述蛋白质旨在用于对患者施用，例如治疗性或诊断性蛋白质。本发明进一步提供了一种方法，其中本发明的环保(environmentally compatible)洗涤剂有效地提供抗病毒活性并保持治疗性或诊断性蛋白质的产品质量。例如，与使用Triton X-100的方法和/或不使用洗涤剂的方法相比，这些方法提供了重要的现实世界的生物产品制造优势。

洗涤剂是治疗性或诊断性蛋白质制造过程中的关键试剂，以确保最终生物产品的安全性。最终生物产品中的病毒污染可产生严重的临床后果，例如，由于源细胞系本身的污染或在各种制造步骤中病毒的偶然引入。因此，洗涤剂用于除去在治疗性或诊断性蛋白质的制造过程中存在于进料流中的病毒污染物的目的。纯化所需蛋白质后，用于产物制造和纯化过程中的生长培养基和缓冲液被灭活并排放到废水中。然而，这种含有在制造和纯化过程中使用的洗涤剂的排放物可引起环境问题，正如洗涤剂的环境风险评估(ERA)所估计的那样。

目前在生物产品(例如治疗性或诊断性蛋白质)的制造过程中灭活病毒的方法在很大程度上依赖于使用洗涤剂Triton X-100。Triton X-100是一种聚氧乙烯醚，通常在不同的实验条件设置下实现稳健的包膜病毒灭活，大于4log。然而，Triton X-100的降解产物4-(1,1,3,3-四甲基丁基)苯酚(又名4-叔辛基苯酚)已被确定为野生动物的潜在环境毒素，包括可能的雌激素作用。因此，需要从废物流中除去4-叔辛基苯酚，但这需要复杂、冗长和昂贵的措施。因此，出于对毒性的担忧，EU-REACH委员会投票将Triton X-100加入欧盟禁用物质清单XIV中，禁止在2021年之后在重组蛋白制造中使用Triton X-100。尚未确立在生物制剂制造中替代Triton X-100的替代试剂。因此，在时间上迫切需要在生物制剂(例如治疗性或诊断性蛋白质)的制造过程中有效灭活病毒的方法，这些方法对环境的毒性低于并入有Triton X-100的方法。

已经探索了在蛋白质制造过程中用于灭活病毒、特别是包膜病毒的Triton X-100的环保替代品，例如在WO2019/121846和WO 2015/073633中。然而，使用不同洗涤剂进行病毒灭活的效果是不同的。由于不溶性或难以从进料流中除去，一些洗涤剂不适合在制造过程中使用。此外，一些洗涤剂增加进料流的浊度和/或起泡，因此需要增加措施来降低进料流的浊度和/或起泡。其他洗涤剂在宽的温度和pH范围内效果不佳，并且需要较高浓度来灭活病毒。这些变化的组合可导致蛋白质制造过程的成本和时间增加。此外，在不同类型和大小的蛋白质的制造进料流中，许多洗涤剂的有效性不足。

因此，仍然需要在不同类型和大小的治疗性或诊断性蛋白质的制造过程中使用环保洗涤剂有效灭活病毒的方法，所述环保洗涤剂在低温和高温以及pH值范围内、在合理的时间和在合理的此类洗涤剂的浓度下，有效灭活不同的包膜病毒，和/或其是水性的、可溶的和/或易于溶解的，和/或不影响进料流的浊度，因此适合大规模制造。此外，优选在纯化步骤中从产物进料流中充分除去洗涤剂(以满足监管要求)，而无需增加复杂、冗长和/或昂贵的措施，并且保持治疗性或诊断性蛋白质的产品质量。