[发明专利]工程化免疫细胞

权利要求书

1.工程化免疫细胞，其包含：

(i)靶标结合多肽，其包含靶标结合结构域和第一蛋白相互作用结构域；和

(ii)定位多肽，其包含与所述第一蛋白结合结构域结合的第二蛋白相互作用结构域以及细胞内保留信号。

2.根据权利要求1的工程化免疫细胞，其包含：

(i)至少两个靶标结合多肽，其中每个靶标结合多肽包含靶标结合结构域和第一蛋白相互作用结构域；和

(ii)定位多肽，其包含与每个靶标结合多肽的第一蛋白结合结构域结合的第二蛋白相互作用结构域以及细胞内保留信号。

3.根据权利要求1或2的工程化免疫细胞，其中所述细胞内保留信号选自下组：高尔基体保留序列；跨高尔基体网络(TGN)回收信号；内质网(ER)保留序列；蛋白酶体定位序列和溶酶体分选信号。

4.根据前述权利要求中任一项的工程化免疫细胞，其中所述细胞内保留信号选自：

a)包含选自以下的氨基酸序列的高尔基体保留序列：SEKDEL(SEQ ID NO:1)、KDEL(SEQID NO:2)、KKXX(SEQ ID NO:3)、KXKXX(SEQ ID NO:4)，包含序列KYKSRRSFIDEKKMP(SEQ IDNO:5)的腺病毒E19蛋白尾部，包含序列MHRRRSRSCR(SEQ ID NO:6)、KXD/E(SEQ ID NO:7)或YQRL(SEQ ID NO:8)的HLA恒定链片段，其中X为任何氨基酸；和/或

b)选自以下的内质网保留结构域：核糖体结合糖蛋白I、核糖体结合糖蛋白II、SEC61或细胞色素b5；和

c)包含表1至5中所示的任何序列的细胞内保留信号。

5.根据前述权利要求中任一项的工程化免疫细胞，其中所述靶标结合结构域或每个靶标结合结构域包含单结构域抗体(dAb)。

6.根据前述权利要求中任一项的工程化免疫细胞，其中所述靶标结合结构域或每个靶标结合结构域与CD3/T细胞受体(TCR)复合物的组分、细胞因子、人白细胞抗原(HLA)I类分子、MHC II类分子、下调免疫应答的受体、在T细胞上表达的配体、或调节免疫应答的胞质蛋白结合。

7.根据权利要求6的工程化免疫细胞，其中所述靶标结合结构域或每个靶标结合结构域与选自下组的靶标结合：

(i)CD3/TCR复合物的组分，其选自：CD3ε、TCRα、TCRαβ、TCRγ、TCRδ、CD3δ、CD3γ和CD3ζ；

(ii)HLAI类分子，其选自：B2-微球蛋白、α1-微球蛋白、α2-微球蛋白和α3-微球蛋白；

(iii)MHC II类分子，其选自：HLA-DP、HLA-DM、HLA-DOA、HLA-DOB、HLA-DQ和HLA-DR；

(iv)下调免疫应答的受体，其选自：程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)、细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)、T细胞免疫球蛋白粘蛋白结构域3(Tim3)、杀伤免疫球蛋白样受体(KIR)、CD94、NKG2A、TIGIT、BTLA、Fas、TBR2、LAG3和蛋白酪氨酸磷酸酶；

(v)在T细胞上表达的配体，其选自：CD5、CD7和CD2；

(vi)调节免疫应答的胞质蛋白，其选自：Csk、SHP1、SHP2、Zap-70、SLP76和AKT。

8.根据前述权利要求中任一项的工程化免疫细胞，其中所述细胞还包含嵌合抗原受体(CAR)或转基因T细胞受体(TCR)。

9.核酸构建体，其包含：

(i)第一核酸序列，其编码包含靶标结合结构域和第一蛋白相互作用结构域的靶标结合多肽；和

(ii)第二核酸序列，其编码包含与所述第一蛋白结合结构域结合的第二蛋白相互作用结构域以及细胞内保留信号的定位多肽。