[发明专利]用于抑制α-突触核蛋白表达的锌指蛋白转录因子

权利要求书

1.融合蛋白，其包含锌指蛋白(ZFP)结构域和转录抑制结构域，其中所述ZFP结构域结合至人α-突触核蛋白基因(SNCA基因)中的靶区域。

2.权利要求1的融合蛋白，其中所述靶区域在所述SNCA基因中转录起始位点(TSS)的1kb之内。

3.权利要求2的融合蛋白，其中所述TSS为TSS 1、TSS 2a或TSS 2b。

4.权利要求3的融合蛋白，其中所述靶区域在所述SNCA基因的TSS 1上游500bp之内，TSS 1下游500bp之内，TSS 2a上游500bp之内，和/或TSS 2b下游500bp之内。

5.前述权利要求中任一项的融合蛋白，其中所述ZFP结构域包含六个锌指且所述融合蛋白任选地抑制所述SNCA基因的表达至少约40％、75％、90％、95％或99％，而没有或具有最小可检测的脱靶结合或活性。

6.前述权利要求中任一项的融合蛋白，其中所述转录抑制结构域包含来自人KOX1的KRAB结构域的氨基酸序列。

7.前述权利要求中任一项的融合蛋白，其中所述ZFP结构域通过肽接头连接至转录抑制物。

8.前述权利要求中任一项的融合蛋白，其中所述ZFP结构域包含表1中所示的DNA结合识别螺旋序列。

9.前述权利要求中任一项的融合蛋白，其中所述ZFP结构域包含如表1单行中所示的DNA结合识别螺旋序列。

10.核酸构建体，其包含权利要求1至9中任一项的融合蛋白的编码序列，其中所述编码序列可操作地连接至转录调节元件。

11.权利要求10的核酸构建体，其中所述转录调节元件为脑细胞中组成型活性或诱导型的哺乳动物启动子，且其中所述启动子任选地为人突触蛋白I启动子。

12.重组病毒，其包含权利要求10或11的核酸构建体。

13.权利要求12的重组病毒，其中所述重组病毒为腺相关病毒载体、腺病毒载体或慢病毒载体。

14.药物组合物，其包含权利要求10或11的核酸构建体或权利要求12或13的重组病毒及药学上可接受的载体。

15.宿主细胞，其包含权利要求10或11的核酸构建体或权利要求12或13的重组病毒。

16.权利要求15的宿主细胞，其中所述宿主细胞为人细胞。

17.权利要求15的宿主细胞，其中所述宿主细胞为脑细胞或多能干细胞，其中所述干细胞任选地为胚胎干细胞或诱导多能干细胞(iPSC)。

18.抑制人脑细胞中α-突触核蛋白的表达的方法，其包括任选地通过引入权利要求10或11的核酸构建体或权利要求12或13的重组病毒，将权利要求1至9中任一项的融合蛋白引入所述细胞中，从而抑制所述细胞中α-突触核蛋白的表达。

19.权利要求18的方法，其中所述人脑细胞为神经元、神经胶质细胞、室管膜细胞或神经上皮细胞。

20.权利要求18或19的方法，其中所述细胞在患者的脑中，所述患者患有以下疾病或具有发展出以下疾病的风险：帕金森病、路易体痴呆、阿尔兹海默症、多系统萎缩或其他突触核蛋白病变(synucleinopathy)。