[发明专利]检测引起急性肝胰腺坏死病的副溶血弧菌有毒性或无毒性的方法

说明书

本发明涉及监测虾的急性肝胰腺坏死病领域。更具体地，本发明公开了检测碱性磷酸酶Phox酶的存在，或引起急性肝胰腺坏死病的副溶血弧菌的PiRAvp和/或PirBvp毒素的存在，分别与所述细菌的无毒性或毒性相关联。因此，能够检测所述Phox酶和/或所述毒素的测定对于监测虾中的所述疾病可能非常有用。

技术领域

本发明涉及监测虾的急性肝胰腺坏死病领域。更具体地，本发明公开了检测碱性磷酸酶Phox酶的存在，或引起急性肝胰腺坏死病的副溶血弧菌的PiRA^VP和/或PirB^VP毒素的存在，分别与所述细菌的无毒性或毒性相关联。因此，能够检测所述Phox酶和/或所述毒素的测定对于监测虾中的所述疾病可能非常有用。

背景技术

革兰氏阴性海洋细菌副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)是重要的水生病原体，并且一些菌株能够引起虾水产养殖中的急性肝胰腺坏死病(AHPND)和其他重要疾病(Jayasree等人，2006；Li等人，2017)。受AHPND影响的地区的虾产量有时大幅下降(至～60％)，并且疾病每年给全球虾养殖业造成10亿美元的损失(Lee等人，2015；Nunan等人，2014)。一些副溶血弧菌菌株确实含有pVA1质粒(63-70kb)，该质粒编码命名为PirA^VP和PirB^VP的二元毒素，它们与发光杆菌(Photorhabdus luminescens)昆虫相关(Pir)毒素PirA/PirB同源(Campa-Córdova等人，2017；Gomez-gil等人，2014；Han等人，2015；Lee等人，2015)。PirA^VP和PirB^VP毒素是介导虾中AHPND病因和死亡率的细菌的主要毒性因子(Campa-Córdova等人，2017；Dong等人，2017；Kumar等人，2018))

然而，后一种毒性表型是否可以转变为无毒性表型以及是否可以通过易于使用的测定测量每种表型分泌的产物来轻松区分所述表型是完全未知的。这种测定对于监测例如虾中的AHPND将非常有用。

附图说明

图1来自不同培养条件的副溶血弧菌细胞外蛋白(VP_AHPND ECP)的考马斯染色SDS-PAGE凝胶，(i)VP_AHPND ECP从副溶血弧菌M0904培养物纯化，持续搅拌(120min^-1)且无絮凝物形成，在13和50kDa处显示两条明显条带(泳道1-4，显示4次重复培养的结果)。(ii)在持续搅拌(110min^-1)和高度絮凝下，从副溶血弧菌M0904培养物纯化的VP_AHPND ECP在73kDa处显示单条明显条带(泳道1-4，显示4次重复培养的结果)。

图2毒性AHPND质粒基因的表达：在不同培养条件下培养的副溶血弧菌M0904菌株的A-ORF14、B-PirB^VP和负责絮凝物形成的基因：C-碱性磷酸酶PhoX。副溶血弧菌M0904菌株在20ml海生菌肉汤中以110min^-1(高度絮凝)或120min^-1(无絮凝物形成)持续搅拌孵育过夜。在12和24h后收集来自两种培养条件的样品用于基因表达测定。对于毒性AHPND质粒基因，在絮凝物形成组中的表达设置为1。然而，对于碱性磷酸酶PhoX基因，在无絮凝物形成组中的表达设置为1。结果为平均值±SE(n＝3)，并表示为相对于副溶血弧菌toxR和rpoAmRNA。星号表示有絮凝物(110rpm)和无絮凝物(120rpm)的副溶血弧菌M0904培养物之间的显著性差异*(P0.05)，**(P0.01)，***(P0.001)，****(P0.0001)，*****(P0.00001)。