[发明专利]用于分离活细胞的容器

说明书

本发明以提供活细胞分离容器为课题。借助以下用于通过推压来粉碎试样的容器解决上述课题，所述容器具有具备开口部的容器主体和将容器主体的上部空间与下部空间隔开的分隔件，分隔件的至少一部分具有相对于容器底部非水平的部分。

技术领域

本发明涉及来自源于生物体的组织的活细胞分离方法、用于在该方法中使用的容器、用于在该方法中使用的试剂盒、使用通过该方法得到的活细胞制造而得的移植片。

背景技术

尽管近年来对心脏病的治疗取得了革命性的发展，但仍未建立针对严重心力衰竭的治疗体系。作为心力衰竭的治疗方法，可实施基于β阻滞剂、ACE抑制剂的内科治疗，而对于已严重到这些治疗不起作用的心力衰竭而言，可实施辅助人工心脏、心脏移植等置换型治疗、即外科治疗。

另一方面，最近，作为治疗严重心力衰竭的解决对策而开展新的再生医学被认为是不可或缺的。在严重心肌梗塞等中，心肌细胞陷入功能衰竭，进而发展出纤维细胞的增殖、间质的纤维化发展，呈现心力衰竭。伴随心力衰竭的发展，心肌细胞遭受损害并陷入凋亡，但由于心肌细胞几乎不发生细胞分裂，因此心肌细胞数量减少而心功能的降低进一步加剧。

细胞移植法对于上述严重心力衰竭患者的心功能恢复是有用的，已经启动了基于骨骼肌成肌细胞的临床应用。

近年来，作为其中一例，提供了包含骨骼肌成肌细胞的、能向心脏移植的三维构建的细胞培养物，及其制备方法(专利文献1)。用于上述细胞移植的骨骼肌成肌细胞通常是从移植的对象的骨骼肌组织中分离骨骼肌成肌细胞和肌卫星细胞等CD56阳性细胞而获得的，作为使从骨骼肌组织中分离出的细胞中所含的CD56阳性细胞的比例提高的对策，已知有以下方法，例如，将骨骼肌组织在蛋白质分解酶溶液中浸渍规定的时间进行酶处理，将处理得到的酶处理液弃置后，再在蛋白质分解酶溶液中浸渍规定的时间以进行酶处理，回收包含于得到的酶处理液中的细胞的方法(专利文献2)。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特表2007-528755号公报

专利文献2：日本特开2011-110368号公报

发明内容

发明要解决的课题

为了如上所述地从源于生物体的组织中分离活细胞，设计了各种分离方法、分离条件。然而，构成各种生物体组织的细胞多种多样，其中干细胞、祖细胞在生物体组织中所占比例低，大多存在于特殊的微环境(niche)中。例如，骨骼肌组织由肌纤维构成，肌纤维的实质是被原生质膜包围的多核细胞，而作为其祖细胞的肌卫星细胞及/或骨骼肌成肌细胞等CD56阳性细胞仅局部存在于肌纤维的基底膜与原生质膜之间，因此为了从对象的骨骼肌组织中分离出这些CD56阳性细胞，需要使肌纤维的基底膜的结合松弛，并且将骨骼肌组织破碎到不破坏CD56阳性细胞的程度。

迄今为止，从骨骼肌组织中分离出CD56阳性细胞主要通过基于人工操作的切碎处理和酶分解处理来进行。通过切碎操作而使肌纤维破坏的操作复杂且需要较长时间，并且辨别方面也取决于操作者的感觉，因此操作者之间在回收活细胞数、存活力等方面存在偏差。如上所述，尚未发现从各种源于生物体的组织中简单、稳定地分离各种活细胞的方法。

用于解决课题的手段

本申请的发明人为了解决上述问题进行了深入研究，结果发现，通过推压使源于生物体的组织、特别是骨骼肌组织破碎，可以提高祖细胞等(以下也称为干细胞)的回收活细胞数、存活力和纯度，从而完成了本发明。

本发明涉及以下内容。

1用于通过推压来粉碎试样的容器，其具有：

具备开口部的容器主体、和将容器主体的上部空间与下部空间隔开的分隔件，

分隔件的至少一部分具有相对于容器底部非水平的部分。