[发明专利]用于异种移植的供体猪

权利要求书

1.一种选择适合作为供体用于组织和/或细胞的异种移植的猪，或作为基础猪用于进一步操作的方法，所述方法包括以下步骤：

a)提供具有4至40之间的低PERV拷贝数的指定无病原体(DPF)猪群；

b)使用全基因组测序(CGS)检测所述畜群个体猪的所述PERV状态；

c)鉴定具有PERV-C和PERV-A/C阴性状态的个体猪；以及

d)选择所述PERV-C和PERV-A/C阴性猪作为供体猪用于异种移植，或作为基础猪用于进一步操作。

2.根据权利要求1所述的方法，进一步包括鉴定步骤d)的所述PERV-C阴性猪的PERV-A和PERV-B状态，并进一步选择具有非常低数量的功能性PERV-A和PERV-B序列的猪，所述PERV-A和PERV-B序列在1-10之间，优选在1-5之间，最优选在1-2之间。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述猪是奥克兰岛(AI)猪。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中，所述猪是PERV-无效。

5.通过权利要求1至4中任一项所述的方法选择的猪。

6.一种繁殖一群不具有功能性PERV基因组序列的猪的方法，所述猪适于作为异种移植的供体或作为基础猪用于进一步操作，所述方法包括以下步骤：

a)使用根据权利要求1至4中任一项所述的CGS选择方法选择PERV-C和PERV-A/C阴性雄性和雌性猪；

b)分析步骤a)的所述雄性猪中任何功能性PERV-A和PERV-B基因序列的所述染色体位置；

c)选择仅在所述Y染色体中存在功能性PERV-A和/或PERV-B的雄性猪；

d)用步骤a)的所述雌性猪繁殖步骤c)的所述雄性猪以产生后代；以及

e)选择缺乏所述父系功能性PERV-A和/或PERV-B的雌性后代作为将来的种畜以产生猪群，所述猪群不具有功能性PERV基因组序列并且适合作为组织和/或细胞的供体用于异种移植，或作为基础猪用于进一步操作。

7.一种通过权利要求6所述的方法繁殖的猪群。

8.一种提供适于将整个器官、组织和/或细胞异种移植到人受者中的供体猪的方法，其包括以下步骤：

(a)使用根据权利要求1至4中任一项所述的CGS方法选择PERV-C和PERV-A/C阴性供体猪，

(b)从步骤(a)的所述猪建立PERV-C和PERV-A/C阴性细胞系；

(c)基因编辑步骤(b)的所述细胞的细胞，以消除或灭活一种或多种异种抗原基因；

(d)任选地基因编辑步骤(c)的选择的分离的细胞以表达一种或多种选自A20、CD39、CD46、CD47、CD55、CD59、血红素加氧酶-1(HO-1)、HLA-E、HLA-G、血栓调节蛋白(TM)、CTLA4-Ig和LEA29Y的人基因；

(e)从步骤(c)或(d)的所述猪细胞建立基因编辑的细胞系；

(f)在体外将一个或多个步骤(e)的所述基因编辑细胞进行体细胞核移植至PERV-C和PERV-A/C阴性猪的卵母细胞中；

(g)培养至胚泡期；

(h)将所述胚泡转移至雌性PERV-C和PERV-A/C阴性猪并生长至足月；以及

(i)提供PERV-C和PERV-A/C阴性并且针对一种或多种异种抗原进行基因编辑的供体猪。

9.根据权利要求8所述的方法，其中，所述一种或多种异种抗原基因选自GGTA1、CAMH、B4GalNT2、Neu5Gc、ASGR1和SLA。

10.一种通过根据权利要求8(a)至(d)或9所述的方法产生的猪细胞系，所述猪细胞系是PERV-C和PERV-A/C阴性的，并且被基因编辑用于失活或缺失一种或多种异种抗原，并任选地用于插入一种或多种人基因。