[发明专利]核酸的随机化构型靶向整合

权利要求书

1.一种用于产生和高通量筛选表达至少一个目的序列(SOI)的靶向整合(TI)宿主细胞文库的方法，其包括：

a)通过如下产生TI宿主细胞文库，其中所述文库包含表达一个或多个SOI的多个TI宿主细胞：

i)提供多个TI宿主细胞；

ii)使所述多个TI宿主细胞与多个载体接触，其中所述载体包含一个或多个SOI；

iii)将所述一个或多个SOI引入所述多个TI宿主细胞中的一个或多个；

b)将所述文库分离成单个克隆；以及

c)针对特定细胞属性或特定产物属性筛选所述克隆。

2.根据权利要求1所述的方法，其中通过重组酶介导的整合，将所述一个或多个SOI引入所述多个TI宿主细胞中的一个或多个。

3.根据权利要求1所述的方法，其中通过基因编辑介导的整合，将所述一个或多个SOI引入所述多个TI宿主细胞中的一个或多个。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述一个或多个SOI可操作地连接至一个或多个可调型启动子。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述一个或多个可调型启动子选自由SV40和CMV启动子组成的组。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述TI宿主细胞为哺乳动物宿主细胞。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述TI宿主细胞为仓鼠宿主细胞、人宿主细胞、大鼠宿主细胞或小鼠宿主细胞。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述TI宿主细胞为CHO宿主细胞、CHO K1宿主细胞、CHO K1SV宿主细胞、DG44宿主细胞、DUKXB-11宿主细胞、CHOK1S宿主细胞或CHO K1M宿主细胞。

9.根据权利要求1所述的方法，其中所述SOI编码多亚基蛋白质的多肽亚基或其片段。

10.根据权利要求1所述的方法，其中所述SOI编码单链抗体、抗体轻链、抗体重链、单链Fv片段(scFv)或Fc融合蛋白。

11.根据权利要求1所述的方法，其中所述特定细胞属性选自：细胞生长、细胞效价、比生产力、体积生产力、克隆稳定性。

12.根据权利要求1所述的方法，其中所述特定产物属性选自：糖基化水平、电荷变化水平、错配减少、蛋白质/肽聚集减少、蛋白质序列异质性。

13.根据权利要求1所述的方法，其中将所述一个或多个SOI在一个或多个基因座处引入所述多个TI宿主细胞中的一个或多个，所述一个或多个基因座与选自下列的序列至少约90％同源：SEQ ID NO.1-12；NW_006874047.1；NW_006884592.1；NW_006881296.1；NW_003616412.1；NW_003615063.1；NW_006882936.1；以及NW_003615411.1。

14.一种产生包含多个外源核苷酸SOI的TI宿主细胞文库的方法，其包括：

a)提供多个TI宿主细胞；

b)使所述多个TI宿主细胞与多个载体接触，其中所述载体包含一个或多个SOI；

c)将所述一个或多个SOI引入所述多个TI宿主细胞中的一个或多个。

15.根据权利要求14所述的方法，其中所述多个TI宿主细胞中的一个或多个包含整合在所述TI宿主细胞的基因组的一个或多个基因座处的一个或多个外源核苷酸序列，并且其中所述外源核苷酸序列包含位于至少一个第一选择标志物的侧翼的至少两个RRS。