[发明专利]用于以双组分体系测量分析物的方法和试剂盒及其用途

说明书

本发明涉及用于使用双组分检测方法测量分析物参数的方法和试剂盒及其用途。要求保护的方法包括用测量的扩展可测量浓度范围来测量分析物的稀释液。在另一方面，本发明涉及使用分析物的稀释液的测量来确定双组分体系的组分的解离常数。所述方法包括用测量的扩展可测量浓度范围来测量分析物的稀释液，确定组分的解离常数以及还以高度并行方式更好的定量双组分检测方法。

本发明涉及使用双组分检测方法测量分析物参数的方法和试剂盒及其用途。要求保护的方法包括用测量的扩展可测量浓度范围来测量分析物的稀释液。测量基于测量的预定非双射标准曲线，从而为每个测量提供读取双组分检测方法的非双射标准曲线的方法。从而在更宽的测量范围内正确地确定用于计算分析物浓度的数学关系。在另一方面，本发明涉及测量方法的所述非双射预定标准曲线在区室化双组分检测方法中的应用。还在另一个方面，本发明涉及使用独特的分子鉴定组分的测量方法的所述非双射预定标准曲线在区室化双组分检测方法中的应用。还在另一方面，本发明涉及确定双组分方法的分析物特异性结合组分的解离常数。要求保护的方法涉及测量的扩展可测量浓度范围，确定组分的解离常数以及还以并行方式更好的定量双组分检测方法。

背景技术

技术领域

本发明涉及使用双组分检测方法测量分析物参数的方法和试剂盒及其用途。还公开了方法和试剂盒的应用。

相关技术的讨论

特别地，本方法和试剂盒非常适合使用双组分检测方法确定分析物浓度并且涉及使用双组分检测方法的更高量级的测量及其用途。

饱和效应或“钩状效应”是检测体系中常见的现象，通常涉及用于捕获特异性结合配偶体或分析物的试剂组分的饱和。然而，在单组分或双组分检测方法的情况下，数学背景是不同的。

通常在均相分析中利用双组分检测体系，其中应用两种组分来产生检测信号。许多这些分析应用邻位概念，并且需要将分析物和组分邻位以产生信号。邻位分析技术诸如FRET(荧光共振能量转移)、BRET(生物发光共振能量转移)(Pfleger,Seeber,Eidne,2006)、青色荧光蛋白(CFP)–黄色荧光蛋白(YFP)对、PCA(蛋白质互补分析)(Morell,Ventura,Avilés,2009)、Alphascreen(Taouji,Dahan,Bosse,Chevet,2009)和DNA标记的邻位方法(PLA–邻位连接分析(proximity ligation assay))、PEA–邻位延伸分析)( et al.,2006)和称为乳液耦合的基于非邻位分析是双分子(双组分)检测体系和方法的代表性实例。

在单组分检测体系中，只需要称为示踪剂的一种分析组分以产生信号。涉及放射性或荧光示踪剂的过滤结合分析是单组分检测体系的良好实例。使用单组分检测体系获得的标准曲线示出了在饱和示踪剂浓度下获得的稳定期(通常也称为“钩”)结束的典型的乙状(sigmoid)形状。这些曲线也称为饱和曲线。

双分子检测体系产生的标准曲线是非典型的。这些曲线是非双射的，并且其特征在于初始浓度依赖性信号增加之后获得的稳定期后信号减小(“钩状效应”)。其中信号开始下降的靶分子浓度范围称为钩状点(hook point)。在钩状点下方，靶分子使分析组分逐渐饱和，并测量到信号增加。在钩状点处，两种组分都被靶分子饱和，并检测到最大信号。在钩状点上方，过量的靶分子使组分过饱和，从而抑制它们的缔合并引起逐渐的信号减小。

在现有技术中，在进行分析物浓度的测量之前，有必要确定两段式非双射标准曲线的钩状点，以确保所有测量都在两段式非双射标准曲线的逐渐饱和段的范围内进行。通常将过饱和认为是测量的失败。

这种要求的失败可能导致不可靠的测量，因为确定的值不唯一地对应于非双射标准曲线上的分析物浓度。

为了避免这样的错误，通常将测量的动态范围限制在非双射标准曲线的逐渐饱和段的动态范围内。

在现有技术中，已知一些途径来解决钩状效应，尤其是在夹心免疫分析中。