[发明专利]用于操纵核酸的方法和组合物

权利要求书

1.一种在载体上产生多个基本上单克隆模板核酸群体的方法，所述方法包括：

(a)获得多个载体，其中每个载体具有固定到所述载体的多个单链寡核苷酸引物和与所述载体连接的模板核酸，其中所述核酸包括所连接的核酸链，所述所连接的核酸链具有在所述链的一端处的连续核苷酸序列，所述连续核苷酸序列是寡核苷酸引物序列；

(b)在存在(i)呈溶液形式的与连接子部分连接的第一引物和(ii)与所述连接子部分连接的组合物的情况下，使与所述多个载体连接的所述模板核酸经受第一等温核酸扩增，其中所述第一引物包括与所述所连接的核酸链的在所述链的与具有连续核苷酸序列的末端相对的末端处的引物结合序列互补的核苷酸序列，所述连续核苷酸序列是所述寡核苷酸引物序列；以及

(c)在存在所述呈溶液形式的与连接子部分连接或不与连接子部分连接的所述第一引物和不存在与所述连接子部分连接的所述组合物的情况下，使与所述多个载体连接的所述模板核酸经受第二等温核酸扩增，由此产生与所述载体连接的基本上单克隆模板核酸群体。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一等温核酸扩增和所述第二等温核酸扩增在单一反应混合物的单一连续液相内进行。

3.根据权利要求1所述的方法，其中：

(i)步骤(a)的所述多个载体中的每个载体具有与所述载体连接的不同双链模板核酸，

(ii)每个双链模板核酸包括与所述载体直接连接的所连接链和与所述所连接链杂交的链，并且

(iii)每个双链模板核酸包括在与所述所连接链杂交的所述链上的连接子部分或在与所述所连接链杂交的所述链上的单链突出端核苷酸序列。

4.根据权利要求3所述的方法，其进一步包括在步骤(a)之后和步骤(b)之前：

(1)通过使步骤(a)的所述多个载体与和所述连接子部分结合的捕获部分或与和所述单链突出端核苷酸序列和捕获部分互补的寡核苷酸接触来形成多个所捕获载体，其中所述与所述单链突出端核苷酸序列互补的寡核苷酸与所述单链突出端杂交并且包括与所述捕获部分结合的连接子部分；

(2)收集所述所捕获载体；以及

(3)将连接有模板核酸的所述载体与所述捕获部分或与所述与所述单链突出端核苷酸序列互补的寡核苷酸分开。

5.根据权利要求4所述的方法，其中步骤(1)的所述多个载体中的每个载体具有与所述载体连接的仅一个双链模板核酸。