[发明专利]靶分子的检测方法

说明书

本发明的对结构体的表面靶分子及内部靶分子进行检测的方法包含：使分散有所述结构体的液体接触于具有多个孔的孔阵列、向所述孔内导入所述结构体；使密封液接触于所述孔阵列、将所述结构体封入在所述孔内；在所述孔内对所述结构体的内容物进行抽提；在所述孔内对存在于所述结构体的表面的至少1种所述表面靶分子进行检测；以及在所述孔内对存在于所述结构体的内部的至少1种所述内部靶分子进行检测。

技术领域

本发明涉及靶分子的检测方法。更具体地说，涉及对存在于结构体表面的表面靶分子及存在于结构体内部的内部靶分子进行检测的方法、结构体的评价方法及试剂盒。

本申请对在2019年5月21日于日本申请的日本特愿2019-095187号主张优先权，将其内容援引至此。

背景技术

通过定量地检测生物体试样中的靶分子来进行疾病的早期发现或给药的效果预测。一直以来，蛋白质的定量通过酶联免疫吸附检测(ELISA)等进行，核酸的定量通过实时PCR法等进行。

近年来，出于更早期地发现疾病等目的，更加精度良好地检测靶分子的需求提高。作为精度良好地检测靶分子的手法，例如在专利文献1、专利文献2及非专利文献1等中记载了在多个微小分区内进行酶反应的技术。这些手法被称作数字化测量。

在数字化测量中，将试样溶液分割成极多个的微小溶液。进而，对来自各微小溶液的信号进行二值化，仅辨别靶分子是否存在，然后测量靶分子数。根据数字化测量，与现有的ELISA或实时PCR法等相比，可以格外地提高检测灵敏度及定量性。

数字化PCR中，按照存在于1个微小液滴中的成为模板的核酸为0个或1个的方式，将PCR反应试剂与核酸的混合物进行稀释。数字化PCR中，为了提高核酸扩增的灵敏度，以及为了对多个微小液滴同时进行核酸扩增，优选各微小液滴的体积小。例如，专利文献3中公开了按照各孔的容积达到6nL(纳升)的方式形成的阵列状的反应容器。另外，专利文献1中公开了下述方法：向形成有多个深度为3μm、直径为5μm的孔的流路中流入试样而将试样导入至各孔中后，使用油将流路内的剩余试剂挤出，从而将试样导入至各孔内。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本专利第6183471号公报

专利文献2：日本特表2014-503831号公报

专利文献3：国际公开第2013/151135号

非专利文献

非专利文献1：Kim S.H.,et al.,Large-scale femtoliter droplet array fordigital counting of single biomolecules.,Lab on a Chip,12(23),4986-4991,2012.

发明内容

发明要解决的技术问题

本发明的目的在于提供对存在于结构体的外部及内部的靶分子进行检测的技术。

用于解决技术问题的手段

本发明包含以下方式。

[1]一种对结构体的表面靶分子及内部靶分子进行检测的方法，其包含：

使分散有所述结构体的液体接触于具有多个孔的孔阵列、向所述孔内导入所述结构体；

使密封液接触于所述孔阵列、将所述结构体封入在所述孔内；

在所述孔内对所述结构体的内容物进行抽提；

在所述孔内对存在于所述结构体的表面的至少1种所述表面靶分子进行检测；以及