[发明专利]用于制备GDP-岩藻糖的酶促方法

权利要求书

1.一种从鸟苷和L-岩藻糖或D-甘露糖产生鸟苷5'-二磷酸-β-L-岩藻糖的方法，包括以下步骤：

A)提供一种溶液，其包含

(i)由以下式表示的鸟苷和L-岩藻糖或鸟苷和D-甘露糖

(ii)多磷酸盐、三磷酸腺苷和用于溶解鸟苷的共溶剂；和

在L-岩藻糖和鸟苷是反应底物的情况下：

提供一组酶，其为鸟苷激酶、多磷酸激酶、L-岩藻糖激酶/L-岩藻糖-1-磷酸鸟苷酸转移酶和焦磷酸酶；或

在D-甘露糖和鸟苷是反应底物的情况下：

(a)提供一组酶，其为鸟苷激酶、鸟苷酸激酶、多磷酸激酶、葡萄糖激酶、磷酸甘露糖变位酶、甘露糖-1-磷酸鸟苷酸转移酶、GDP-甘露糖-4,6-脱水酶、GDP-L-岩藻糖合酶、焦磷酸酶和谷氨酸脱氢酶；或

(b)提供一组酶，其为鸟苷激酶、鸟苷酸激酶、多磷酸激酶、N-乙酰己糖胺-1-激酶、磷酸甘露糖变位酶、甘露糖-1-磷酸鸟苷酸转移酶、GDP-甘露糖4,6-脱水酶、GDP-L-岩藻糖合酶、焦磷酸酶和谷氨酸脱氢酶；

B)在该组酶、多磷酸盐、三磷酸腺苷和共溶剂的存在下从鸟苷和L-岩藻糖或在该组酶、多磷酸盐、三磷酸腺苷、NADPH和共溶剂的存在下从鸟苷和D-甘露糖产生鸟苷5'-二磷酸-β-L-岩藻糖，

其中

共溶剂是二甲亚砜，并且基于步骤A)中提供的溶液的总体积，共溶剂的量为1体积％至10体积％。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述溶液包含

鸟苷和L-岩藻糖；和

该组酶为鸟苷激酶、多磷酸激酶、L-岩藻糖激酶/L-岩藻糖-1-磷酸鸟苷酸转移酶和焦磷酸酶。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述溶液包含

鸟苷和D-甘露糖；和

该组酶为鸟苷激酶、鸟苷酸激酶、多磷酸激酶和(a)葡萄糖激酶、磷酸甘露糖变位酶、甘露糖1-磷酸鸟苷酸转移酶、GDP-甘露糖-4,6-脱水酶、GDP-L-岩藻糖合酶、焦磷酸酶和谷氨酸脱氢酶或(b)N-乙酰己糖胺-1-激酶、磷酸甘露糖变位酶、甘露糖-1-磷酸鸟苷酸转移酶、GDP-甘露糖4,6-脱水酶、GDP-L-岩藻糖合酶、焦磷酸酶和谷氨酸脱氢酶。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中该组酶被共同固定在固体支持物上。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述至少一种酶被固定在来自细胞裂解物的固体支持物上，或者该组酶被共同固定在来自细胞裂解物的固体支持物上。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中鸟苷5'-二磷酸-β-L-岩藻糖在单一反应混合物中产生。

7.根据权利要求1或3至6中任一项所述的方法，其中该方法还包括步骤

在存在岩藻糖基转移酶且不存在受体的情况下，从鸟苷5'-二磷酸-β-L-岩藻糖产生L-岩藻糖；或者

通过在80至100℃的范围内的温度下加热鸟苷5'-二磷酸-β-L-岩藻糖来产生L-岩藻糖。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，还包括以下步骤：

C)分离鸟苷5'-二磷酸-β-L-岩藻糖。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，还包括以下步骤：

D)通过在岩藻糖基转移酶的存在下在鸟苷5'-二磷酸-β-L-岩藻糖和糖、糖肽、糖蛋白、蛋白质、肽或小分子的可用羟基之间形成O-糖苷键从鸟苷5'-二磷酸-β-L-岩藻糖和糖、糖肽、糖蛋白、蛋白质、肽或小分子产生岩藻糖基化的糖、岩藻糖基化的糖肽、岩藻糖基化的糖蛋白、岩藻糖基化的蛋白质、岩藻糖基化的肽或小分子。