[发明专利]用于多价分子的功能分析的基于SPR的结合测定

权利要求书

1.一种用于确定至少二价双特异性抗体对其第一抗原和第二抗原的基于亲合力的结合强度的方法，所述方法包括

-根据表面等离子体共振信号确定所述二价双特异性抗体的所述基于亲合力的结合强度，所述SPR信号通过将包含所述二价双特异性抗体的溶液施加到共价融合多肽所缀合的固相并随后监测所述SPR信号而获得，所述共价融合多肽在一个末端包含所述第一抗原并且在不同的第二末端包含所述第二抗原，

其中所述至少二价双特异性抗体包含与第一非抗体抗原特异性结合的第一结合位点和与不同的第二非抗体抗原特异性结合的第二结合位点。

2.根据权利要求1所述的方法，其进一步包括以下步骤：

a)在固相上捕获第一抗原-第二抗原融合多肽，

b)向步骤a)的所述固相施加包含第一浓度的所述二价双特异性抗体的第一溶液以形成捕获的第一抗原-第二抗原融合多肽-二价双特异性抗体复合物并且确定第一表面等离子体共振响应，

c)解离所述捕获的第一抗原-第二抗原融合多肽-二价双特异性抗体复合物，并由此再生所述固相，

d)至少用包含第二浓度的所述二价双特异性抗体的第二溶液重复步骤b)和c)并且确定第二表面等离子体共振响应，其中所有浓度均是不同的，

e)根据如在先前步骤中所确定的所述表面等离子体共振响应来确定所述至少二价双特异性抗体对所述第一抗原和所述第二抗原的所述基于亲合力的结合强度。

3.根据权利要求1至2中任一项所述的方法，其中在一个末端包含所述第一抗原并且在不同的第二末端包含所述第二抗原的每个共价融合多肽分别与所述固相缀合。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述第一抗原至少是所述第一抗原的包含所述二价双特异性抗体的所述第一结合位点的表位的片段，并且所述第二抗原至少是所述第二抗原的包含所述二价双特异性抗体的所述第二结合位点的表位的片段。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述第一抗原与所述第二抗原不同。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述固相是表面等离子体共振芯片。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述第一抗原-第二抗原融合多肽是包含第一多肽和第二多肽的异二聚体多肽，所述第一多肽是所述第一抗原和包含第一组异二聚化突变的第一抗体重链Fc区多肽的融合多肽，所述第二多肽是所述第二抗原和包含第二组异二聚化突变的第二抗体重链Fc区多肽的融合多肽，所述第二组异二聚化突变与所述第一组异二聚化突变互补。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述第一抗原和所述第二抗原在相应的所述第一Fc区多肽或所述第二Fc区多肽的N末端。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述第一抗原-第二抗原融合多肽包含用于固定到固相的标签。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述标签在相应的所述Fc区多肽的C末端。

11.根据权利要求7至10中任一项所述的方法，其中所述Fc区属于人IgG1同种型。

12.根据权利要求7至11中任一项所述的方法，其中所述第一组异二聚化突变和所述第二组异二聚化突变分别是T366W和T366S/L368A/Y407V，反之亦然。