[发明专利]抑制乙型肝炎病毒蛋白产生的医药组合物及筛选方法

说明书

本发明的课题在于提供一种作为新型抗乙型肝炎病毒剂有用的医药组合物及筛选方法。根据本发明，提供一种医药组合物，其抑制乙型肝炎病毒蛋白产生，所述医药组合物的特征在于，对选自相当于乙型肝炎病毒基因组DNA上的增强子I区域序列的乙型肝炎病毒RNA序列及相当于乙型肝炎病毒基因组DNA上的增强子II区域序列的乙型肝炎病毒RNA序列中的至少一种序列抑制所结合的RNA结合蛋白的表达或功能。

技术领域

本发明涉及一种具有抗乙型肝炎病毒活性的医药组合物及筛选抑制乙型肝炎病毒蛋白产生的物质的方法。

背景技术

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus、HBV)为属于肝炎病毒属的病毒且直径约42nm的球状DNA病毒。病毒本身为包含外被(外膜、envelope)、不完整双链的DNA、DNA聚合酶及反转录酶等的由直径27nm的芯(core)组成的DNA病毒，称为Dane粒子。形成双重结构，外侧由HBs抗原(hepatitis Bsurface antigen、HBsAg)组成，内侧由HBc抗原(hepatitis B coreantigen、HBcAg)及基因DNA组成(非专利文献1)。

HBs抗原除了Dane粒子以外，以中空粒子、小型球形粒子或杆状粒子的形式存在。

HBV的基因组DNA中具有pre-S/S基因区域、P基因区域、X基因区域、pre-C/C基因区域该4种开读框(open reading frame、ORF)、3个启动子及2个增强子(Enhancer、Enh)区域。X基因区域的core promoter、C基因区域的precore区域与HBe抗原(hepatitis B envelopeantigen、HBeAg)构成蛋白的产生有关，通过该区域的point mutation而不会产生HBe抗原构成蛋白，成为HBe抗原阴性。

并且，2个增强子区域称为增强子I(Enhancer I、EnhI)及增强子II(Enhancer II、EnhII)，均能够使3个所有启动子活性增大(专利文献1)。

若HBV侵入肝细胞，则不完整环状双链DNA进入肝细胞的核内，并转化为共价闭合环状DNA(covalenty closed circular DNA、cccDNA)。在HBV的慢性感染状态下，cccDNA在每一个肝细胞中为5～50个，并且以微型染色体的形式存在。从肝细胞核内的cccDNA转录4种RNA，由这些作为结构蛋白的HBs抗原、HBc抗原及HBe抗原、X蛋白以及包含反转录酶的聚合酶被翻译。RNA之一作为pregenomic RNA进入核粒子中，通过反转录酶的作用合成负链DNA，接着成为合成正链DNA的不完整环状双链DNA。另外，包裹于由HBs抗原形成的外膜中，成为病毒粒子(Dane粒子)而释放到血中。通过RNA翻译的包含HBs抗原、HBc抗原及p22cr抗原的中空粒子(没有DNA的核的粒子)或通过肝细胞膜的HBe抗原等与Dane粒子的血中释放路径无关地大量释放且分泌到血中。该作用认为是HBV感染中避免了宿主免疫机构的攻击的作用。HBe抗原、HBc抗原及p22cr抗原能够作为HBcr抗原(hepatitis B core-relatedantigen、HBcrAg)而测定，用作病毒复制的标记(非专利文献1)。

乙型肝炎是通过感染HBV而发病的病毒性肝炎之一，在全世界感染人数为约2亿4000万人。如上所述，若感染HBV，则Dane粒子释放到血中并且除了Dane粒子的释放路径以外病毒蛋白大量分泌到血中。指出有在病毒蛋白中，尤其HBs抗原干扰基于作为宿主的人体的免疫机构的感染细胞的排除的可能性(非专利文献2、3)。然而，认为乙型肝炎的治疗中重要的是减少Dane粒子、即抑制病毒的增殖、并且减少包含HBs抗原的病毒蛋白。

乙型肝炎的第一选择药中使用恩替卡韦或替诺福韦等核酸类似物。核酸类似物制剂抑制HBV聚合酶蛋白的活性并且抑制不完整环状双链DNA的产生，由此能够减少血中的Dane粒子、即抑制病毒的增殖。然而，核酸类似物制剂无法减少HBs抗原，因此难以实现基于宿主免疫机构的感染细胞的排除。因此，期望开发能够实现减少HBs抗原的医药品。