[发明专利]用于治疗癌症的修饰的IL-12 T细胞疗法

说明书

本申请提供包含肿瘤靶向性和膜锚定性IL‑12的嵌合抗原受体(CAR)样构建体。本申请还提供表达所述CAR样IL‑12构建体的T细胞。此外，本申请还提供治疗癌症的方法，所述方法包括施用表达CAR样IL‑12构建体的T细胞。

本申请要求于2019年2月1日提交的美国临时专利申请号62/800,136的利益，该专利申请通过引用完全结合在本文中。

背景

1.技术领域

本发明整体上涉及免疫学和医学领域。更具体地，本发明涉及修饰的IL-12 T细胞疗法及其用于治疗癌症的用途。

2.相关技术描述

自体肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)输注已成为治疗难治性黑色素瘤患者的重大突破且其引起的反应率高于BRAF靶向疗法或CTLA-4阻断疗法。大部分患者应该经历对TIL转移的反应，这是因为可以自其肿瘤分离TIL。然而，在实践中，反应率仅为约50％，包括10％-15％的完全反应率(Besser等人,2010；Radvanyi等人,2012；Dudley等人,2005)。

TIL疗法中的主要挑战在于TIL在再输注后的肿瘤归巢能力降低以及肿瘤微环境的变化。在最近的临床试验中，输注1.5-2x10¹¹个TIL以确保足够的肿瘤靶向性TIL和成功的肿瘤缓解(Radvanyi等人,2012；Dudley等人,2005)。然而，将如此大量的TIL转移至癌症患者可能引起脱靶不良作用。需要容许将TIL更有效地递送至肿瘤部位且由此需要数量少得多的输注T细胞的方式。

TIL不能到达肿瘤部位的一个原因在于在离体培养期间损失肿瘤归巢特性；因此，新疗法使用已经用识别肿瘤抗原(例如CD19)的受体改造的T细胞，其被称为嵌合抗原受体(CAR)-T细胞疗法。CAR-T细胞疗法更特异性地靶向肿瘤细胞且在治疗血液学恶性肿瘤方面已取得重大成功，其中CAR-T细胞靶向血液和骨髓中的肿瘤细胞。然而，CAR-T细胞疗法在实体肿瘤中的功效有限。实体肿瘤细胞因其异质性而缺乏常见抗原。另外，宿主调理作用(host conditioning)通常避免T细胞进入肿瘤间质中。

在使用T细胞疗法(包括CAR-T、TIL和TCR-T(CTL)细胞)治疗实体肿瘤中存在多个挑战，包含逃避抗原或靶特异性T细胞攻击的肿瘤异质性、T细胞渗透至实体肿瘤中、免疫抑制环境使浸润T细胞失活、以及效应T细胞耗竭。因此，对于能够深入渗透到实体肿瘤中的T细胞疗法存在尚未满足的需求。

发明内容

在第一实施方案中，本发明提供编码肿瘤靶向性和膜锚定性白介素12(IL-12)的构建体。IL-12可以包含IL-12α亚基p35和IL-12β亚基p40。

在一些方面中，p35亚基融合至跨膜结构域(TM)(例如EGFR跨膜结构域)。在某些方面中，p35/TM亚基进一步融合至信号传导结构域(SD)。例如，信号传导结构域是CD3ζ、CD28和/或4-1BB信号传导结构域。在特定方面中，信号传导结构域包含CD3ζ和4-1BB信号传导域。在一些方面中，信号传导结构域是4-1BB。

在某些方面中，p40亚基融合至肿瘤靶向性部分。例如，肿瘤靶向性部分是肽、抗体或其片段。在一些方面中，抗体或其片段是选自由以下组成的组：F(ab’)2、Fab’、Fab、Fv和scFv。在特定方面中，抗体或其片段是scFv。在一些方面中，肿瘤靶向性部分是肽。在具体方面中，肿瘤靶向性部分特异性结合细胞表面波形蛋白(CSV)，例如CSV肽。在其他方面中，p40亚基融合至跨膜结构域和/或信号传导结构域且p35亚基融合至肿瘤靶向性部分。包含p35融合亚基(p35/TM/SD)和p40融合体(p40-肿瘤靶向性部分)的异源二聚体在本文中称为嵌合抗原受体(CAR)样IL12(CARL-IL12)。

在一些方面中，构建体是病毒载体。例如，病毒载体是逆转录病毒载体或慢病毒载体。