[发明专利]靶向纳米颗粒以及它们的与真菌感染有关的用途

说明书

本文提供了用于诊断、治疗或预防真菌感染的靶向纳米颗粒。

本申请要求2019年1月8日提交的美国临时申请第62/789,862号和2019年10月10日提交的美国临时申请第62/913,489号的优先权，这两项申请都通过引用以其整体并入本文。

背景技术

数百种土著真菌会导致各种各样的疾病，包括曲霉病、芽生菌病、念珠菌病、球孢子菌病(山谷热)、隐球菌病、组织胞浆菌病、皮肤真菌病和肺孢子虫性肺炎(PCP)，仅举几个例子。总的来说，致病性真菌感染许多不同的器官，但皮肤和肺是最常见的部位。一些真菌病只是致残，而另一些则危及生命。尽管对真菌感染病理学的理解有所进步，但目前诊断和治疗真菌感染的方法仍有不足。

发明内容

本文提供了用于诊断、治疗或预防真菌感染的靶向纳米颗粒，例如脂质体。一些脂质体包含抗真菌剂和结合真菌细胞上的靶抗原的靶向分子。在本文提供的脂质体中，靶向分子被掺入到脂质体的外表面中，而抗真菌剂被包封在脂质体中。

进一步提供了治疗或预防受试者真菌感染的方法，其包括向患有真菌感染或有罹患真菌感染风险的受试者施用脂质体的多重体，其中所述多重体中的每个脂质体均包含抗真菌剂和结合真菌细胞上的靶抗原的靶向分子，其中靶向分子被掺入到脂质体的外表面中，而抗真菌剂被包封在脂质体中。

还提供了制备脂质体的多重体的方法，该脂质体包含抗真菌剂和结合真菌细胞上的靶抗原的靶向分子，其中靶向分子被掺入到每个脂质体的外表面，而抗真菌剂被包封在每个脂质体中。所述方法包括：(a)在约60℃下将抗真菌剂溶解或悬浮在溶剂中约10分钟至约30分钟；(b)通过将呈悬浮液形式的脂质体的多重体与步骤a)的抗真菌剂/溶剂溶液在约60℃下混合约3至约5小时，或在约37℃下混合约24-120小时来将抗真菌剂包封到每个脂质体中；以及(c)通过使包含包封的抗真菌剂的脂质体与缀合至脂质的靶向分子在约60℃下接触约45分钟至约90分钟来将靶向分子掺入到每个脂质体的外表面中。

还提供了包含结合靶真菌抗原的靶向分子的脂质体，其中靶向分子被掺入到脂质体的外表面中，并且其中靶向分子连接至当靶向分子结合靶真菌抗原时产生信号的分子。在一些实例中，靶向分子连接至荧光蛋白的C末端和/或N末端片段或荧光蛋白的片段。

进一步提供了用于检测受试者中或受试者的样本中真菌感染的方法，其包括：a)使受试者或所述受试者的样本与脂质体的多重体接触，其中所述多重体中的每个脂质体均包含结合靶真菌抗原的靶向分子，其中靶向分子被掺入到脂质体的外表面中，并且其中靶向分子被连接至当靶向分子结合靶真菌抗原时产生信号的分子；以及b)检测信号，其中信号指示真菌感染的存在。

附图说明

本申请包括以下附图。附图旨在说明所述组合物和方法的某些实施方案和/或特征，并旨在补充所述组合物和方法的任何一项或多项描述。附图不限制所述组合物和方法的范围，除非书面描述明确表明情况如此。

图1A示出了编码示例性密码子优化的可溶性小鼠Dectin-1(sDectin-1)的核酸序列(SEQ ID NO:1)。9个密码子的载体pET-45b+序列加有方框，起始密码子加有下划线。用于克隆到pET-45B+KpnI(GGTACC)(SEQ ID NO:23)和PacI(TTAATTAA)(SEQ ID NO:21)中的位点分别加有下划线。Gly Ser(G,S)柔性接头残基的密码子以粗体示出，并且反应性lys(K)残基(AAG)的密码子以粗体示出，赖氨酸密码子以斜体示出。小鼠sDectin-1序列(CLEC7A，GenBank登记号AAS37670.1)以纯文本示出；Ala密码子GCT和终止密码子TAA和TTA加有下划线，终止密码子以粗体示出。替代基因名称MmsDectin1lyshis。核苷酸序列的长度为604个碱基对，其中597个碱基对编码长度为199个氨基酸的蛋白质。编码示例性密码子优化的小鼠sDectin-1的核酸被克隆到pET-45B+中。