[实用新型]用于检测酶末端修复能力的试剂盒

说明书

本实用新型涉及一种用于检测酶末端修复能力的试剂盒，其包括，测试底物盛装组件，末端修复酶盛装组件，末端修复试剂盛装组件，末端修复反应组件，以及反应产物检测组件。从而提供了一种更为快速、便捷和安全的用于检测酶的末端修复能力的试剂盒。

技术领域

本实用新型属于分子生物学领域，具体涉及一种用于检测酶末端修复能力的试剂盒。

背景技术

近些年日益成熟的高通量测序技术(Generation Sequencing，NGS)因通量高、准确性高、灵敏性高、自动化程度高和运行低成本等突出的优势，使其应用于多个研究领域，比如无创产前检测、染色体异常检测、基因组测序、外显子测序、转录组测序、表观基因组测序、染色体三维结构测序等。二代测序的主流平台一般均采用边合成边测序(SequencingBy Synthesis,SBS)技术进行核酸测序。测序前，需要对核酸(DNA或RNA)样本进行测序文库的构建，基本流程如下：步骤 A:将片段化后的DNA进行片段的末端修复，步骤B：在修复后的片段3′端加“A”碱基，步骤C：将上述DNA片段与含有测序引物结合位点的DNA接头(Adapter)连接，步骤D：通过PCR进行扩增，完成测序文库构建。在文库构建方法中通常需要采用4-6种主要的酶，以及与这些酶活性相适应的反应体系，其中任何一种酶的活性存在问题，都会对建库实验的结果产生直接的影响，以及造成不必要的时间成本和经济成本的浪费。

在建库过程中，对DNA片段具有末端修复能力的酶起到了关键作用，例如，采用具有末端修复能力的酶将片段化的DNA片段进行末端修复，得到平末端DNA 片段，此时，具有末端修复能力的酶的活性是影响末端修复的关键因素，而在DNA 测序文库构建过程中，末端修复步骤是建库成功的基础步骤。

目前，对酶的活性检测需要通过同位素技术和专门仪器，但由于其对同位素和仪器的依赖而费时较多和不便于操作，同时，同位素多存在放射性，会对有机体造成不同程度的损伤。因此，亟需一种更为快速、便捷和安全的用于检测酶的，特别是对DNA片段具有末端修复能力的酶的检测方法和检测试剂盒。

实用新型内容

鉴于上述现有技术中存在的问题，本实用新型的目的在于提供一种用于检测酶末端修复能力的试剂盒，包括测试底物盛装组件，末端修复酶盛装组件，末端修复试剂盛装组件，末端修复反应组件，以及反应产物检测组件。

2.根据项1所述的试剂盒，所述测试底物盛装组件仅有唯一底物盛装槽。

3.根据项1所述的试剂盒，所述测试底物盛装组件用于盛装用于检测酶末端修复能力的核酸序列。

4.根据项3所述的试剂盒，所述用于检测酶末端修复能力的核酸序列包括双链区域和非双链区域，所述非双链区域位于所述核酸序列的末端，用于末端修复的酶作用于所述非双链区域。

5.根据项4所述的试剂盒，所述用于末端修复的酶具有3′→5′外切酶活性和 /或5′→3′聚合活性。

6.根据项1所述的试剂盒，所述末端修复反应组件仅有唯一反应槽。

7.根据项6所述的试剂盒，所述末端修复反应组件位于所述测试底物盛装组件，末端修复酶盛装组件，末端修复试剂盛装组件的下游，用于将所有盛装组件内的反应组分共同在所述唯一反应槽内进行反应。

8.根据项6所述的试剂盒，所述反应产物检测组件位于所述末端修复反应组件的下游，用于将所述末端修复反应组件获得的反应产物进行产物特征检测，从而获得酶的末端修复能力检测结果。

9.根据项8所述的试剂盒，所述产物特征为双链区域的碱基数目和/或位于双链区域5′端的非双链区域的碱基数目。

与现有技术相比，本实用新型的有益效果是：提供了用于检测酶末端修复能力的试剂盒，其仅有唯一底物盛装槽和唯一末端修复反应槽，就能够完成对具有末端修复能力的酶的至少两项能力的同时检测。其操作步骤人工参与少，流程简便快捷，检测结果准确稳定，无放射性有害物质，安全性更高。