[实用新型]一种结合超滤法和超速离心法的外泌体提取离心管

说明书

本实用新型涉及分子生物学及临床检验技术领域，具体是一种结合超滤法和超速离心法的外泌体提取离心管，包括管体、管盖和管体内的超滤膜。超滤膜呈倒圆锥形置于所述管体内，超滤膜顶部嵌入管体底部的凹槽；管体内壁设有固定所述超滤膜上沿的凸起。通过结合超速离心法和超滤法，将超滤膜设置为倒圆锥形进行细胞上清液离心来提取外泌体，简化了管体的结构和外泌体提取的步骤，提高了外泌体提取效率。

技术领域

本实用新型涉及分子生物学及临床检验技术领域，具体是一种结合超滤法和超速离心法的外泌体提取离心管。

背景技术

外泌体是一种由活细胞分泌，直径在40-150nm，具有双层脂质膜结构的小囊泡，它在机体内广泛存在，如外周血、腹水、尿液、唾液、脑脊液等各种体液中。目前主要使用的外泌体提取方法主要为超速离心法、超滤法、密度梯度离心法、试剂盒提取、免疫磁珠法等，但超速离心法和超滤法应用较为普遍。

超速离心法大体包含4个步骤：(1)低速离心去除残留细胞；(2)高速离心去除细胞碎片；(3)0.22μm滤膜过滤去除大直径囊泡；(4)超速离心沉淀外泌体，为提高纯度可选用蔗糖密度梯度离心。但超速离心法也有操作耗时长、分离效率低、仪器昂贵等缺点。

超滤法是将溶剂及小分子物质过滤到膜的另一侧，而将相对大分子物质截留在超滤膜上，以达到分离的目的。外泌体直径范围40～150nm，最常见的过滤膜具有0.8μm、0.45μm或0.22μm的孔径，可用于收集大于800nm、400nm或200nm物质，也有设计成微柱多孔硅纤毛结构以分离40-100nm外泌体。但超滤法的过滤膜上容易形成死细胞残体和蛋白质等多种物质的堆积，堵塞的可能性大，影响过滤效率，更会导致外泌体的粘附，从而造成损失。而且，过滤时的压力和剪切力，可能会使外泌体变形受损。

目前市面上的离心过滤装置，结构复杂，生产不够便利，且容易造成提取的外泌体破损，提取效率低。

实用新型内容

针对上述问题，本实用新型提出了结合超滤法和超速离心法的外泌体提取离心管，结合超速离心法和超滤法，实现简化外泌体提取步骤以及管体结构的目的。

本实用新型提出的技术方案如下：一种结合超滤法和超速离心法的外泌体提取离心管，包括管体、管盖和管体内的超滤膜；所述超滤膜孔径在0.15-0.30μm之间，呈倒圆锥形置于所述管体内，所述超滤膜顶部嵌入所述管体底部的凹槽口；所述管体内壁设有固定所述超滤膜上沿的凸起，当离心机旋转时，可确保超滤膜不会脱落。

进一步作为本实用新型技术方案的改进，所述超滤膜为孔径0.22μm的超滤膜。

进一步作为本实用新型技术方案的改进，所述凸起为呈环形均匀分布在所述管体内壁的三个凸点，即可达到固定超滤膜的目的。

进一步作为本实用新型技术方案的改进，所述凹槽为凸起的中空环形凹槽。

进一步作为本实用新型技术方案的改进，所述凸点与所述凹槽为所述管体内部一体注塑成型，以强化该部分的结构强度。

进一步作为本实用新型技术方案的改进，所述管盖与所述管体的顶端管口采用螺纹连接或卡扣连接。

采用本技术方案所达到的有益效果为：

1、通过将超滤膜设置为倒圆锥形，使得超滤膜斜置，低速离心时大分子沉积在超滤膜底部，但不堵塞超滤膜上部，避免了现有技术的超滤膜垂直放置，而使超滤膜孔被细胞或者生物大分子堵塞的问题，从而影响外泌体分离率。

2、通过在管体内壁设置几个凸点，以及在管体底部设置凹槽，使得超滤膜和管体之间的连接稳固，保证超滤膜在离心时不会晃动脱落，造成提取失败，与现有技术相比，少量的凸点在达到同样固定超滤膜的作用下，更加节省材料、简便。

附图说明

图1为本实用新型平面结构剖视图。