[发明专利]一种脂质体包裹人干细胞混悬液的制备方法

权利要求书

1.一种脂质体包裹人干细胞混悬液的制备方法，其特征在于：包含如下步骤：

第一步、取清洗干净的脐带碎块，向50毫升离心管中加入5毫升脐带碎块和20毫升2毫克/毫升胶原酶IV，在37℃摇床上消化1.5-2小时，每管加入完全培养基到45毫升刻度，在2200转/分离心10分钟，其中，完全培养基为DMEM/F12，并按体积比加入2％胎牛血清，培养条件为37℃，饱和湿度，5％CO₂培养箱中静止培养，弃除上悬液，再将每个离心管中分散的细胞悬浮于40毫升完全培养基中，每3天更换一次完全培养液，再使用磷酸盐缓冲盐水清洗培养的细胞2次，质量百分数为0.25％胰酶-EDTA消化，待细胞悬浮后加入2.5毫升5％FBS培养基，在1000转/分离心10分钟，再悬浮于总量40毫升质量百分数为5％FBS培养基，每3天换一次5％FBS培养基，培养细胞直到长满90％面积，从此开始收集培养上清液，冻存在-20℃，得间充质干细胞培养液上清液；

第二步、将磷脂、胆固醇、吐温-80和抗氧化剂溶于无水乙醇中，其中，磷脂、胆固醇、吐温-80和抗氧化剂的总质量与无水乙醇的质量比为1∶3～1∶4，将混合特旋转蒸发，控制水浴温度35-40℃，旋转转速20～80r/min，真空度维持在0.010-0.020MPa，直至溶剂去除将薄膜洗下，得到乳浊液，再将乳浊液置搅拌30-50min，控制搅拌器温度为40-45℃，转速为60～100r/min，搅拌结束后再进行超声整粒，得到空白脂质体悬液；

第三步：将上述制备的间充质干细胞培养液上清液和空白脂质体悬液混合，制得含间充质脂质体干细胞的脂质体混悬液。

2.根据权利要求1所述的一种脂质体包裹人干细胞混悬液的制备方法，其特征在于所述的脂质体混悬液采用ELISA方法检测脐带间充质干细胞培养上清液中galectin-3的含量来判断其免疫抑制效力，人脐带间充质干细胞培养上清液中galectin-3的含量低于2.5ng/ml判定为人脐带间充质干细胞免疫抑制效力不合格。

3.根据权利要求1所述的一种脂质体包裹人干细胞混悬液的制备方法，期特征在于制得的干细胞混悬液可以用于治疗皮肤皱纹、色斑和瘢痕。