[发明专利]塞尼卡谷病毒3D蛋白在制备免疫应答诱导剂或者佐剂中的应用

说明书

本发明属于病毒免疫学领域，尤其是涉及SVA的3D蛋白的新功能，如：3D蛋白可作为NLRP3介导的炎症信号转导激活剂进行应用，3D蛋白激活了IL‑1β的产生和分泌。同时发现了3D蛋白通过其N端1～154aa与NLRP3的NATCH结构域相互作用，并以调控钙离子和钾离子的细胞内的浓度变化方式激活细胞内NLRP3炎症小体介导的IL‑1β的产生和分泌。本发明为为SVA的防控以及3D蛋白可以作为佐剂激活炎症反应提供了新的靶点和理论支持。

技术领域

本发明属于生物技术领域和病毒免疫学领域，尤其是涉及SVA（Senecavirus A）的蛋白3D的新功能，即SVA 3D蛋白可以诱导IL-1β的分泌，最终导致SVA病毒复制降低，起到促进免疫反应的作用。

背景技术

炎症是身体自然愈合过程的一部分，但是当它变成慢性时，它会导致癌症、阿尔茨海默病和其他疾病。在对细胞应激、组织损伤或传染性病原体产生的不同信号作出反应时，炎性体（inflammasome）触发炎症产生。白介素1（IL-1β）是一种炎性细胞因子或激素，是分泌蛋白，通常由巨噬细胞产生，在宿主抗病毒免疫应答过程中发挥关键作用。炎症的有益影响和不利影响都是由IL-1β引发的。在正常情形下，IL-1β以非常低的数量产生，但是当对组织损伤、环境应激、感染或慢性炎症作出反应时，IL-1β的产生高度地增加。IL-1β的分泌可以促进大量的急性蛋白表达，同时也参与机体局部的免疫调节作用，如促进B细胞的生长和分化以及抗体的形成；促进单核细胞的抗原递呈能力等，以IL-1β通路为靶标的治疗已成功地应用于许多病毒感染的临床治疗，如在治疗干眼病的过程中，通过局部敷用靶向IL-1的拮抗剂药物可显著的降低干眼病的相关症状以及眼表疾病；临床还可以通过抑制IL-1途径治疗痛风。IL-1β在病毒诱导应答过程中，机体受到病毒刺激应答，通过模式识别受体信号通路激活NF-κB信号通路，导致IL-1β前体的产生，此为信号1；同时病毒诱导炎症小体活化，如NLRP3炎症小体活化，活化过程包括NLRP3与ASC形成复合体，然后结合Caspase1的前体，并使其形成成熟的Caspase1，成熟的Caspase1对IL-1β前体进行切割，最终形成成熟的IL-1β并分泌至胞外，产生炎症反应。

为了对抗宿主适度的免疫防御，病毒获得了无数的策略，其中之一就是针对IL-1β产生的信号通路，包括抑制炎症小体活化以及激活炎性小体使得其过度活化。例如，脊髓灰质炎病毒（EV71）的基因组能够活化NLRP3诱导的IL-1β的分泌。寨卡病毒（Zika）的NS5作为非结构蛋白能够通过结合NLRP3的LRRs和NACHT结构域激活NLRP3炎症小体。EMCV的2B蛋白也参与激活NLRP3炎症小体介导的IL-1β的分泌。许多病毒蛋白也同样抑制NLRP3炎症小体的活化，如流感病毒的NS1蛋白利用其N端结构抑制IL-1β以及IL-18的表达。麻疹病毒V蛋白结合NLRP3的C端，进而阻止NLRP3介导的IL-1β的分泌。EV71的2A和3C蛋白通过降解NLRP3抑制IL-1β的表达。

塞内卡病毒病是由A型塞内卡病毒引起的动物传染病，主要感染猪，对不同年龄阶段的猪都易感。在2015年初，巴西、泰国和中国首次暴发了由塞内卡病毒引起的水疱性疾病。同年，研究发现病毒感染与新生仔猪死亡率相关。SVA属于RNA病毒科（Picornaviridae），SVA具有小RNA病毒基因组的典型特征，其基因组RNA由大约7200个核苷酸（nt）组成。该病毒基因组仅有一个开放阅读框（open reading frames，ORF），编码约2180个氨基酸的多聚蛋白。由先导蛋白（L）、P1（裂解VP1、VP2、VP3和VP4四种结构蛋白）、P2（裂解为2A、2B和2C三种非结构蛋白）、P3（裂解成3A、3B、3C和3D四种非结构蛋白）组成。3D蛋白是SVA的一个重要病毒蛋白，为病毒聚合酶。同时3D蛋白也参与结合宿主因子，但研究较少，如同科SVA的3D蛋白能够与宿主因子相互作用如Sam68、DDX1等，其具体的机制不清楚，SVA 3D蛋白的参与免疫和炎症反应的研究目前是空白。

发明内容