[发明专利]一种应用相对电导率筛选辣椒抗白绢病种质材料的方法

权利要求书

1.一种应用相对电导率筛选辣椒抗白绢病种质材料的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)分离并纯化辣椒白绢病菌，制备病原菌接种菌饼；

(2)培育待鉴定辣椒苗，采用菌饼包埋法进行接种，将病原菌接种于辣椒苗茎基部；

(3)接种后日常管理培养5d，取样检测各植株的电导率，计算相对电导率，鉴定不同辣椒材料对辣椒白绢病的抗病性，筛选抗性材料；

所述植株电导百分率测定具体步骤为：取辣椒苗上部定型叶片，每个样品三份各称取0.2g，分为对照组和处理组，剪成5mm x 5mm的小块，立即投入10ml无离子水试管中，使叶片沉入水中，浸泡7h，期间间歇振荡，浸泡结束后，测定水溶液电导率，然后将材料煮沸20min，冷却置室温后加无离子水补充至10ml，再浸泡过夜，次日再测量电导率；

所述相对电导率的计算公式为：

电导百分率＝叶片煮沸前外渗液的电导值/叶片煮沸后外渗液的电导值x100％；

相对电导率＝(处理组电导百分率-对照组电导百分率)/对照组电导百分率x100％。

2.根据权利要求1所述的应用相对电导率筛选辣椒抗白绢病种质材料的方法，其特征在于，所述步骤(1)的具体过程为：从发病田间采集具有典型症状的病株，挑取菌丝或菌核接种于PDA培养基中，置于28℃的培养箱中暗培养4-5d，选择无杂菌污染、生长状况良好的菌落，挑取白绢病菌菌丝或菌核，接入新的PDA培养基中，然后置入28℃的培养箱中暗培养4-5天，重复2-3次直至无杂菌污染；收集无杂菌污染的菌丝提取DNA进行18S PCR扩增，扩增序列经测序、比对分析，结合形态学鉴定为辣椒白绢病菌后保存至冰箱备用；使用前挑取菌核或菌丝块移至装有PDA培养基的无菌培养皿中央，于28℃恒温培养箱中进行繁殖，将培养4-5d的PDA培养基打孔，制成接种用的白绢病菌菌饼待用。

3.根据权利要求1所述的应用相对电导率筛选辣椒抗白绢病种质材料的方法，其特征在于，步骤(2)中用育苗基质培育待鉴定辣椒苗，所述育苗基质使用前于121℃蒸汽灭菌30min。

4.根据权利要求1所述的应用相对电导率筛选辣椒抗白绢病种质材料的方法，其特征在于，步骤(2)中培育待鉴定辣椒苗时，先将待鉴定辣椒种子用体积分数为75％的乙醇浸泡5min，灭菌水振荡洗涤2-3次；用质量分数为1％的次氯酸钠溶液消毒8-10min，灭菌水洗涤2-3次；再温水浸种3h后28℃恒温培养箱催芽，最后播种于育苗钵内。

5.根据权利要求1或4所述的应用相对电导率筛选辣椒抗白绢病种质材料的方法，其特征在于，步骤(2)中育苗温度为26-29℃。

6.根据权利要求1所述的应用相对电导率筛选辣椒抗白绢病种质材料的方法，其特征在于，步骤(2)中所述病原菌接种时期为辣椒苗8-10片真叶完全展平。

7.根据权利要求1所述的应用相对电导率筛选辣椒抗白绢病种质材料的方法，其特征在于，步骤(2)中所述菌饼包埋法具体为：将菌饼置于距辣椒苗茎基部1cm处，覆盖0.3-0.5mm育苗基质，接种后喷水至育苗基质湿度饱和，并加盖覆盖物进行保湿处理。

8.根据权利要求1所述的应用相对电导率筛选辣椒抗白绢病种质材料的方法，其特征在于，步骤(3)中所述接种后日常管理具体为：辣椒苗先暗培养12h，随后转为白天温度27-29℃，夜间温度25-27℃的环境条件，接种期间保持育苗基质水分含量接近饱和。

9.根据权利要求1所述的应用相对电导率筛选辣椒抗白绢病种质材料的方法，其特征在于，步骤(3)中抗病性的评价标准为：按相对电导率：0，免疫；＞0且≤10％，高抗；＞10％且≤30％，抗病；＞30％且≤50％，中抗；＞50％且≤70％，感病；＞70％，高感。