[发明专利]藜麦蛋白在抗植物病菌中的应用

权利要求书

1.藜麦蛋白在抗植物病菌中的应用，所述藜麦蛋白通过如下步骤及方法制得：

(1)将藜麦种子粉碎并脱脂，称取一定量的脱脂藜麦粉，按照料液比(W/V)1：15溶于20mmol/L pH 4.5的乙酸-乙酸铵缓冲液中，在4℃下搅拌浸提14.6小时，之后将上述样品于12000r/min离心30min，收集上清弃沉淀，即得到藜麦种子蛋白粗提液；

(2)将粗提液在4℃条件下缓慢加入一定量的饱和度为80％硫酸铵，边加边搅拌，待硫酸铵完全溶解后放入4℃冰箱中静置沉淀4h以上，12000r/min离心30min，弃去上清，沉淀用20mmol/L、pH 7.0的PBS缓冲液将其溶解，用相同的缓冲液在4℃下透析20h，期间更换3-4次缓冲液，之后4℃12000r/min离心30min，收集上清液；

(3)将上述上清液上样于AKTA PURIFIER蛋白纯化系统，DEAE-FF阴离子柱预先用20mmol/L、pH为7.0PBS缓冲液平衡好，每次上样20mL，相同缓冲液进行洗脱，流速为2mL/min，洗去未吸附的蛋白后，用含0.5mol/L的NaCl的上述缓冲液进行洗脱，流速为2mL/min，收集30％洗脱组分；

(4)将上述DEAE-FF阴离子交换后得到的洗脱组分用20mmol/L、pH 7.0的PBS缓冲液进行透析，之后使用浓缩管浓缩后，上样于预先用20mmol/L、pH 7.0的PBS缓冲液平衡好的Sephacry S-200凝胶过滤色谱柱上，每次上样5mL，流速为1mL/min，收集洗脱峰，冷冻干燥，即得到藜麦蛋白；

所述的植物病菌为细极链格孢菌(Alternaria tenuissima)或茄腐镰刀菌(Fusariumsolani)。