[发明专利]用于心肌肌钙蛋白I检测的组合物及应用和磁微球电化学发光免疫检测试剂盒与检测方法

说明书

本发明涉及电化学检测领域，特别涉及用于心肌肌钙蛋白I(Troponin I)检测的组合物及应用和磁微球电化学发光免疫检测试剂盒与检测方法。本发明采用方法为电化学发光法，采用吡啶钌作为化学发光标记物具有明显优势，主要表现在：灵敏度更好，稳定性更好，钌是金属离子，分子量小，不影响抗体的空间位阻。生产过程短，重复性好，检测范围宽。电化学发光反应可控，降低信号采集难度。

技术领域

本发明涉及电化学检测领域，特别涉及用于心肌肌钙蛋白I(Troponin I) 检测的组合物，该组合物的应用，包含该组合物的磁微球电化学发光免疫检测试剂盒，以及基于该组合物或试剂盒的磁微球电化学发光免疫检测方法。

背景技术

肌钙蛋白I(TnI)是横纹肌的一种关键调节蛋白。由于组织特异性高，心肌肌钙蛋白I(cTnI)是心肌损伤的高敏感性标志物。cTnI还可用于鉴别骨骼肌损伤(如横纹肌溶解、多发性损伤)和心肌损伤。

cTnI升高可见于急性心肌梗死(AMI)、不稳定性心绞痛(UAP)和充血性心力衰竭(CHF)。cTnI已经明确是急性冠状动脉综合症(ACS)患者的预后标志物，可以预测近期、中期甚至长期预后。cTnI和cTnT已确定是预测ACS后果的最佳独立标志物，也是ACC/AHA(美国心脏病学会)对UAP 和NSTEMI患者处理导则的一部分。

肌钙蛋白的升高可以说明心肌损伤，但并不能说明缺血的机制。MI这个术语应当用于有心脏损伤迹象，如心肌缺血同时也检测到了蛋白标志物。如果临床情况表明没有发生缺血，那么应当考虑其他原因导致心脏损伤。

到目前为止，用于检测人血清中cTnI的方法主要有：酶联免疫法(ELISA) 和酶促磁微粒化学发光；本发明采用方法为电化学发光法，采用吡啶钌作为化学发光标记物具有明显优势，主要表现在：灵敏度更好，稳定性更好，钌是金属离子，分子量小，不影响抗体的空间位阻。生产过程短，检测范围宽，重复性好。电化学发光反应可控，降低信号采集难度。

发明内容

本发明提供了一种用于心肌肌钙蛋白I(Troponin I)检测的组合物及应用和磁微球电化学发光免疫检测试剂盒与检测方法，具有生产效率高、检测时间短、适用于全自动检测，具有更高的灵敏度、线性范围宽等优点。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了用于心肌肌钙蛋白I(Troponin I)检测的组合物，包括 Troponin I试剂Ra、Troponin I试剂Rb、链霉亲和素超顺磁微球；

所述Troponin I试剂Ra包括含生物素标记的抗Troponin I单克隆抗体；

所述Troponin I试剂Rb包括含三联吡啶钌标记的抗Troponin I单克隆抗体；

所述链霉亲和素超顺磁微球包括表面包裹带有链霉亲和素的超顺磁微球。

在本发明的一些具体实施方案中，所述超顺磁微球的粒径在1.5～5.0μm。

在本发明的一些具体实施方案中，所述Troponin I试剂Ra中，每个抗体分子表面的生物素分子标记量为2～5个；所述Troponin I试剂Rb中，每个抗体分子表面的钌分子标记量为2～10个。

在本发明的一些具体实施方案中，所述Troponin I试剂Ra的制备方法为：在缓冲液存在的条件下，取抗Troponin I单克隆抗体与生物素混合，制得所述 Troponin I试剂Ra；所述缓冲液包括pH＝7.4～7.8、20mM～200mM的磷酸盐缓冲液或pH＝7.4～7.8、20mM～200mM的三羟甲基氨基甲烷缓冲液。