[发明专利]一种包载海参皂苷的自组装纳米体系及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种包载海参皂苷的自组装纳米体系及其制备方法和应用，属于生物技术领域。本发明首先利用1,6‑α‑D‑葡聚糖与棕榈酰氯反应生成棕榈酰化葡聚糖，分离纯化得到棕榈酰化葡聚糖化合物；再将得到的棕榈酰化葡聚糖溶于乙醇中制成薄膜，加入含海参皂苷的磷酸盐缓冲溶液，搅拌形成包载海参皂苷的棕榈酰化葡聚糖自组装体系。本发明制备的包载海参皂苷的棕榈酰化葡聚糖自组装体系包封率为69％，在海参皂苷浓度为600μg/mL时溶血率小于5％，符合注射药物的要求。通过细胞毒性试验证明了本发明制备的包载海参皂苷的棕榈酰化葡聚糖自组装体系具有抑制肿瘤细胞的作用，能够用于制备抗肿瘤药物。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种包载海参皂苷的自组装纳米体系及其制备方法和应用。

背景技术

海参皂苷是海参体内重要的次生代谢产物，具有抗肿瘤、抗真菌等多种药理活性。近年来，海参皂苷较好的抗肿瘤活性逐渐引起大家的关注。但口服海参皂苷易被消化系统内的酶降解，影响其生物利用度。静脉注射给药海参皂苷，因其可与生物膜上的甾醇分子结合，使红细胞穿孔引起溶血，以上原因限制了海参皂苷作为抗肿瘤药物的开发利用。因此，降低海参皂苷类化合物的溶血毒性对其临床抗肿瘤药物的开发具有重要的意义。

据文献报道，目前仅从几种滋补品如龙眼、人参、甘薯等中分离得到1,6连接的α-D-葡聚糖。非专利文献“葛根中(1→6)-α-D-葡聚糖的结构，构象及其硫酸化衍生物抗氧化活性，崔恒祥等”公开了葛根中提取的(1→6)-α-D-葡聚糖，中国专利文件CN104861085A公开了板栗中提取的1,6-α-D-葡聚糖。但现有尚未有利用1,6-α-D-葡聚糖降低海参皂苷溶血毒性的报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种包载海参皂苷的自组装纳米体系及其制备方法和应用，以解决上述现有技术存在的问题，将海参皂苷包载于棕榈酰化葡聚糖的自组装体系中形成纳米复合物，克服了海参皂苷的溶血毒性，为海参皂苷作为抗肿瘤药物的开发利用提供一个安全有效的纳米载药体系。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

本发明提供一种包载海参皂苷的自组装纳米体系，所述的自组装纳米体系为棕榈酰化葡聚糖自组装纳米体系。

本发明提供一种所述的包载海参皂苷的自组装纳米体系的制备方法，包括以下步骤：

1)棕榈酰化葡聚糖合成：用1,6-α-D-葡聚糖与棕榈酰氯反应生成棕榈酰化葡聚糖，分离纯化得到棕榈酰化葡聚糖化合物；

2)包载海参皂苷棕榈酰化葡聚糖自组装体系构建：将步骤1)中得到的棕榈酰化葡聚糖化合物溶于乙醇中制成薄膜，加入含海参皂苷的磷酸盐缓冲溶液，搅拌形成包载海参皂苷的棕榈酰化葡聚糖自组装纳米体系。

优选的，所述步骤1)具体步骤为：称取1,6-α-D-葡聚糖至无水N,N-二甲基甲酰胺中，加热使其充分溶解，再加入无水吡啶和无水棕榈酰氯，搅拌反应，反应结束后加入去离子水终止反应，乙醇醇沉，离心收集多糖衍生物，凝胶色谱分离纯化，硫酸-苯酚检测，收集多糖组分，浓缩冻干后即得棕榈酰化葡聚糖化合物。

优选的，所述1,6-α-D-葡聚糖与无水N,N-二甲基甲酰胺的质量体积比为12.5mg：1ml。

优选的，所述无水棕榈酰氯与1,6-α-D-葡聚糖的质量比为3：10。

优选的，所述步骤1)中搅拌反应的时间为80h。

优选的，步骤2)中将棕榈酰化葡聚糖化合物溶于乙醇中制成薄膜的具体步骤为：棕榈酰化葡聚糖化合物30mg溶于乙醇溶液中，40℃减压旋转蒸发干燥，制备棕榈酰化葡聚糖的薄膜。

优选的，所述步骤2)中的含海参皂苷的磷酸盐缓冲溶液中海参皂苷的浓度为1mg/mL。

优选的，所述步骤2)中搅拌的方法为：轻轻振摇，室温搅拌过夜后，超声探头超声2min。