[发明专利]一种分枝杆菌的17β-羟基类固醇脱氢酶突变体和工程菌及其应用有效
| 申请号： | 202011620794.3 | 申请日： | 2020-12-31 |
| 公开（公告）号： | CN112813041B | 公开（公告）日： | 2022-03-18 |
| 发明（设计）人： | 李会;许正宏;刘伟;史劲松;薛苗苗;龚劲松;张晓梅 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N9/04 | 分类号： | C12N9/04;C12N15/53;C12N15/74;C12N15/75;C12N1/21;C12P33/18;C12R1/125;C12R1/32 |
| 代理公司： | 南京经纬专利商标代理有限公司 32200 | 代理人： | 唐蕙芬 |
| 地址： | 214122 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 分枝杆菌 17 羟基 类固醇 脱氢酶 突变体 工程 及其 应用 | ||
1.一种17β-羟基类固醇脱氢酶突变体，其特征在于：氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。
2.如权利要求1所述的一种17β-羟基类固醇脱氢酶突变体，其特征在于：所述17β-羟基类固醇脱氢酶突变体为17β-HSDy2，是通过将出发氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的亲本分枝杆菌LY-1的17β-羟基类固醇脱氢酶的第173位亮氨酸突变为缬氨酸得到的。
3.如权利要求2所述的一种17β-羟基类固醇脱氢酶突变体，其特征在于：所述17β-羟基类固醇脱氢酶的基因来源于分枝杆菌（
4.一种17β-羟基类固醇脱氢酶突变体的基因，其特征在于：核苷酸序列为以下任意一种：
如SEQ ID NO.3所示的碱基序列；
编码如SEQ ID NO.4所示氨基酸序列的核苷酸序列。
5.一种携带权利要求4所述基因的重组表达质粒，其特征在于：所述重组表达质粒为pMA5-17βHSDy2或pMV261-17βHSDy2。
6.一株表达17β-羟基类固醇脱氢酶的工程菌株，其特征在于，所述工程菌株整合有权利要求4所述的17β-羟基类固醇脱氢酶突变体的基因，或含有权利要求5所述的重组表达质粒。
7.根据权利要求6所述的工程菌株，其特征在于，所述工程菌株为枯草芽孢杆菌WB600或分枝杆菌LY-1。
8.权利要求6所述的工程菌株和/或该工程菌株分泌表达的粗酶液在制备睾酮中的应用，其特征在于，所述制备睾酮为将植物甾醇和/或雄甾烯-4-烯-3，17-二酮转化为睾酮。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，将所述工程菌株和/或该工程菌株的粗酶液转接至含15 g/L植物甾醇和/或1.5 g/L雄甾烯-4-烯-3，17-二酮的培养基中，30°C，220r·min-1转化7 d，得到睾酮。
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