[发明专利]一种双向抗体重组的外泌体及其制备方法在审
| 申请号： | 202011620768.0 | 申请日： | 2020-12-31 |
| 公开（公告）号： | CN112941029A | 公开（公告）日： | 2021-06-11 |
| 发明（设计）人： | 徐丽梅;段莉;梁宇杰;徐晓 | 申请（专利权）人： | 深圳市第二人民医院(深圳市转化医学研究院) |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/85;C12N15/62;A61K39/00;A61P35/00 |
| 代理公司： | 北京挺立专利事务所(普通合伙) 11265 | 代理人： | 吴彩凤 |
| 地址： | 518000 广东省深*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 双向 抗体 重组 外泌体 及其 制备 方法 | ||
1.一种双向抗体重组的外泌体，其特征在于：该外泌体为CAR-Exos，其表面包括有两种抗体，其中一个为具有遗传编码的抗人CD3抗体，另一个为具有遗传编码的抗人CD38抗体。
2.根据权利要求1所述的一种双向抗体重组的外泌体，其特征在于：类血小板源性生长因子受体的跨膜域作为融合靶蛋白在外泌体CAR-Exos表面展示CD3抗体和CD38抗体。
3.根据权利要求1所述的一种双向抗体重组的外泌体，其特征在于：该外泌体CAR-Exos用于治疗多发性多发骨髓瘤。
4.根据权利要求3所述的一种双向抗体重组的外泌体，其特征在于：该外泌体CAR-Exos将人T细胞募集到CD38阳性多发性多发骨髓瘤细胞中。
5.一种权利要求1-4任意一项所述的双向抗体重组的外泌体的制备方法，其特征在于，包括以下制作步骤：
步骤一：每50mL细胞需要准备50μg pDisplay-CD3 scfv-CD38 nanobody质粒，用2mLOpti-MEM培养基稀释质粒，混匀后静置5分钟；
步骤二：每50mL细胞需要准备100μL PEI试剂，用2mL Opti-MEM培养基稀释，混匀后静置5分钟；
步骤三：将步骤一、步骤二中试剂混匀静置15分钟；
步骤四：3.将试剂加入细胞中，混匀，放置于轨道摇床置于≥80％相对湿度和8％CO2的37℃培养箱内进行培养
步骤五：72h后收集外泌体；
步骤六：收获的细胞培养的上清液体含有将外泌体在4℃下以100×g离心10分钟，并以4000×g，离心30分钟，然后14000×g保持50分钟；
步骤七：然后收集上清液然后使用0.2μm注射器过滤器过滤后的上清在超高速离心转子中以200,000×g离心2小时；
步骤八：倒出上清液后，获得纯化后的外泌体。
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