[发明专利]含有特异性分子靶标的副溶血性弧菌标准菌株及其检测和应用

说明书

本发明涉及生物工程技术领域，具体涉及3株具有我国自主知识产权的、符合国内传播规律的副溶血性弧菌标准菌株，可用作食品、药品、临床检验等不同领域的标准参考菌株。其保藏号分别为GDMCC 60870、GDMCC 60871和GDMCC 60872。3株标准菌株具有典型的生理生化特征，且样品来源、遗传背景、耐药性、毒力基因等信息清晰，完全满足食品、药品、临床检验等方面对于标准菌株的要求。本发明还涉及一组用于检测、鉴别上述3株标准菌株的特异性靶标基因以及对应的PCR产物。最后，本发明还提供了一种存活率高、特异性的副溶血性弧菌冻干保护剂，可用于本发明标准菌株的长期储存。

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，具体涉及含有特异性分子靶标的副溶血性弧菌标准菌株及其检测和应用。

背景技术

副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)是革兰氏阴性、嗜盐性细菌，是我国一种重要的食源性致病细菌，广泛存在于海水，咸水湖及海产品中，能够感染虾、蟹、牡蛎、各种贝类等各种水产经济动物，引起鱼类皮肤溃疡、虾红体病等弧菌病，威胁海洋渔业和水产养殖业的发展。同时，人们食用了携带致病性副溶血性弧菌的食物往往会造成急性胃肠炎，其主要症状有恶心、呕吐、腹泻、头痛及低烧，严重者可导致败血症。了解该菌的传播规律以及致病性进化是有效防控该菌所致的食源性疾病的基础，而是否使用了合适的标准菌株决定了研究结果的可靠性。

目前研究该菌的进化规律和致病性使用的标准菌株大部分为国外临床来源的菌株，并不能很好地反映该菌在食品中的传播特征，且中国作为世界重要的水产品消费国，水产品中副溶血性弧菌的检出率一直处于不低的水平，却缺乏代表性的分离株来研究该菌在中国的遗传结构和传播规律。

目前为止还有没一种用于制备定量副溶血弧菌质控菌的冻干保护剂。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供3株副溶血性弧菌标准菌株及检测该标准菌株的特异性分子靶标和应用。本发明的副溶血性弧菌为中国地区的水产分离菌株，该菌株具有典型的副溶血性弧菌生理生化特性，且能较好地反映该菌在中国地区的遗传背景。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：

一组副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)标准菌株，包括保藏编号分别GDMCC 60870、GDMCC 60871和GDMCC 60872的副溶血性弧菌。

本发明从中国国内本土的食品中筛选出了3株副溶血性弧菌，这3株副溶血性弧菌携带特殊序列，具有特异性的分子靶标位点，所述分子靶标序列如SEQ ID NO.1～5所示。本发明人对这些副溶血性弧菌分别进行了保藏，具体保藏信息以及来源信息如下：

副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)VP2227C2分离自鲜虾样品，其分类命名为副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)，已于2019年10月27号保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC 60870；副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)VPS179C3分离自鲜虾样品，其分类命名为副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)，已于2019年10月27号保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC 60871；副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)3630A3分离自鲜虾样品，其分类命名为副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)，已于2019年10月27号保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC 60872。

进一步地，所述保藏编号为GDMCC 60870的副溶血性弧菌含有如SEQ ID NO:1～3所示的核苷酸序列；所述保藏编号为GDMCC 60871的副溶血性弧菌含有如SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列；所述保藏编号为GDMCC 60872的副溶血性弧菌含有如SEQ ID NO:5所示的核苷酸序列。